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血清蛋白瓊脂糖凝膠電泳原理

瓊脂糖(agarose)是經過挑選，以質地較純的瓊脂(agar)作為原料而制成的。瓊脂在化學上是由瓊脂糖和瓊脂膠組成的復合物。瓊脂膠是一含有硫酸根和羥基的多糖，它具有離子交換性質，這種性質會給電泳...

2016-11-18 圍觀794次 [原理] 高教職教

血清蛋白瓊脂糖凝膠電泳實驗操作方法

【試劑】1、蘇丹黑染色液將蘇丹黑B加到無水乙醇中至飽和，搖蕩使乙?；?。用前過濾。上海創賽科技提供4197-25-5，蘇丹黑B，GR，商品編號：D16-1032969-100G，價格431元。2、巴比妥緩沖液稱取巴比...

2016-11-18 圍觀932次 [應用] 高教職教

規范操作避免PCR反應污染方法

PCR反應常見的污染表現為：標本間交叉污染，PCR試劑污染、PCR擴增產物污染以及實驗中兊隆質粒的污染。為了有效地避克這些污染，使得實驗的結果更準確、更直觀:1.合理分隔實驗室將樣品的處理、配...

2016-11-16 圍觀717次 [應用] 高教職教

實時熒光定量PCR技術

實時熒光定量PCR技術(Real-timeqPCR)是一種在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,最后通過特定數學原理對未知模板進行定量分枂的方法。因其定量準確、特異性強、操...

2016-11-11 圍觀976次 [方案] 高教職教

ES細胞的凍存方法

操作方法1.常規方法將細胞消化成單細胞懸液;2.轉入試管，1000轉/分鐘離心5分鐘;3.配適量凍存液(為含10%二甲亞砜(DMSO)，10%FBS的DMEM培養液);上海創賽科技提供67-68-5，二甲亞砜，DimethylSulfo...

2016-11-09 圍觀515次 [維修] 高教職教

ES細胞的復蘇方法

1.提前制備好相應數量的Feeder;2.準備37-39℃的熱水，從液氮罐中取出所需凍存管(凍存細胞)，迅速投入熱水中，迅速劇烈搖動直至凍存液全部融化;上海創賽科技提供細胞凍存管，FreezingTubes，商品...

2016-11-08 圍觀622次 [維修] 高教職教

ES細胞的傳代操作方法

步驟：1.前一天下午做好所需數量的Feeder細胞板;2.提前半小時左右將培養基從4℃冰箱取出，放于室溫(或者放于37℃溫箱內);3.將ES細胞培養皿、Feeder細胞培養皿從培養箱內取出(相差顯微鏡下作常規...

2016-11-04 圍觀1296次 [維修] 高教職教

飼養層細胞（Feeder）的制備

飼養層細胞(Feeder)的制備注：含10ug/ml絲裂霉素C的DMEM血清培養基(FBS占10%)(實驗室所用MMC為10mg/mL，Calbiochem)1.棄去細胞培養皿中的培養液，加入適量含10ug/ml絲裂霉素C的培養基(DMEM+10%F...

2016-11-03 圍觀3244次 [維修] 高教職教

原代胚胎成纖維細胞（ME）的制備

1.取12.5-13.5dpc孕鼠，斷頸處死;2.將鼠腹面向上放置，70%酒精潤濕、消毒腹部(防止腹毛飛揚，污染內臟及子宮)，剪開皮膚層、肌肉層，打開腹腔，將連接在子宮上的結締組織及脂肪剪去，將子宮取出...

2016-11-02 圍觀1343次 [維修] 高教職教

DMEM培養基配置方法

一、配制DMEM血清培養基1.提前一天將分裝好的FBS從20℃冰箱取出，放于4℃冰箱化凍；2.在細胞間中將FBS以及其它需要添加的成分（如，丙酮酸鈉、抗生素等），按照比例加入DMEM培養基中，作好標簽；...

2016-11-01 圍觀11582次 [維修] 高教職教

FBS的滅活與分裝

1.化凍將血清(FetalBovineSerum，Hyclone)從-20℃冰箱取出，放于4℃冰箱化凍過夜;也可室溫(或浸于自來水中)化凍，化凍后若不馬上滅活，可以放入4℃冰箱暫時保存;2.滅活(1)放入室溫的水浴鍋內開始...

2016-10-31 圍觀4014次 [維修] 高教職教

如何查找連續的mRNA、cDNA、蛋白序列

如何查找連續的mRNA、cDNA、蛋白序列(以人類的IL6為例)1、進入NCBI主頁：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/在search后面選擇Gene，在for后面填寫需要查找的基因的名字。如圖所示：點擊Go，出現以下界...

2016-10-28 圍觀1388次 [維修] 高教職教

利用Map viewer查找基因序列、mRNA序列

利用Mapviewer查找基因序列、mRNA序列、啟動子(Promoter)NCBI(NationalCenterforBiotechnologyInformation)是指美國國立生物技術信息中心。理解自然無聲但精妙的關于生命細胞的語言是現代分子生...

2016-10-27 圍觀1323次 [維修] 高教職教

用微生物挑戰性試驗評價化妝品防腐劑效果

防腐劑是化妝品工業中非常重要的部分。隨著化妝品種類和劑型的繁多,及高科技生物原料應用的增加,許多化妝品公司都在積極研究防腐劑問題(包括其品種和使用濃度),并不斷建立新的防腐體系。在評價防...

2016-10-26 圍觀1706次 [方案] 高教職教

實驗動物免疫方案

用免疫學的基本理論和技術來診斷、預防和治療疾病，并在此基礎上開展的采用人工方法向機體輸入由他人或動物產生的免疫效應物，如免疫血清、淋巴因子等，使機體立即獲得免疫力。其特點是產生作用...

2016-10-24 圍觀727次 [方案] 高教職教

PD-1/PD-L1抑制劑在腫瘤治療中應用

腫瘤的免疫治療是以激發和增強機體的免疫功能，以達到控制和殺滅腫瘤細胞的目的。腫瘤免疫治療是當前腫瘤治療領域中最具前景的研究方向之一。在過去不久的諾貝爾醫學獎熱門獲獎名單中，腫瘤治療...

2016-10-21 圍觀960次 [應用] 高教職教

VR元年收宮之作該是怎樣一款“黑科技”

2016年已經進入了金秋十月的尾巴，行業內該發布的產品差不多已經發布完，接下來開始備戰雙十一營銷和年終促銷?；仡櫦磳⑦^去的虛擬現實元年，可謂一路高歌，國內外都推出了不少VR產品。但要選一...

2016-10-20 圍觀215次 [前沿] 高教

免疫共沉淀方法進行蛋白質檢測的優缺點

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下...

2016-10-20 圍觀1225次 [維修] 高教

撰寫體外診斷試劑制造檢定規程的有關問題

撰寫體外診斷試劑制造檢定規程的有關問題制造檢定規程的具體內容來源于診斷試劑研究工作的結論，即根據研究報告中相關的結論，撰寫規程中有關原料和輔料方面、制造程序方面以及檢定項目和指標方...

2016-10-18 圍觀390次 [維修] 高教職教

開發用于篩檢試驗的體外診斷試劑的注意問題

按臨床使用目的，可以將診斷試劑分為用于篩檢試驗(Screeningtest)和用于臨床診斷(Diagnostictest)兩類。篩檢試驗是指應用簡便快速的實驗或其它檢測方法，從大量表面健康的人群中查出某種疾病可疑...

2016-10-17 圍觀291次 [維修] 高教職教

成年豬胰島分離純化方法的優化

成年豬胰島分離純化方法的優化實驗試劑膠原酶V，512kut/mg，DNA酶，胎牛血清，RPMI1640培養液，Dextran，Hanks平衡鹽溶液。以上實驗產品上海創賽科技均可現貨供應，歡迎訂購咨詢。實驗設備離心機...

2016-10-14 圍觀209次 [維修] 高教職教

細菌內毒素的概念介紹

細菌內毒素，英文稱作Enolotoxin，是G-菌細胞壁個層上的特有結構，內毒素為外源性致熱原，它可激活中性粒細胞等，使之釋放出一種內源性熱原質，作用于體溫調節中樞引起發熱。內毒素的主要化學成...

2016-10-13 圍觀513次 [原理] 高教職教

酸性磷酸酶的顯示方法實驗步驟

實驗試劑1.10%中性福爾馬林(pH6.8～7.1)甲醛10ml蒸餾水90ml醋酸鈉2g2.酸性磷酸酶作用液蒸餾水90ml0.2mol/L醋酸緩沖液(pH4.6)12ml5%硝酸鉛2ml3.2%甘油磷酸鈉4ml先將蒸餾水和醋酸緩沖液混合，隨后...

2016-10-11 圍觀574次 [技術] 高教職教

如何搞定免疫熒光

免疫熒光是標記免疫技術發展最早的一種，它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術，通過將抗體與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。免...

2016-10-10 圍觀264次 [應用] 高教職教

淋巴細胞的采集和培養方法

方法一1、稀釋。我們要留血漿(肝素鈉抗凝的采血管采的血，5～6ml)，所以分離、取出血漿后加入和紅細胞等體積的生理鹽水，一般3ml左右，混勻。上海創賽科技提供肝素鈉，Heparinsodiumsalt,商品編...

2016-10-09 圍觀569次 [維修] 高教職教

凋亡相關蛋白TFAR19的表達和細胞定位分析

TFAR19(PDCD5)是由本研究室在國際上首先報導的一個擁有自己知識產權的人類新基因，前期的功能研究表明，它是促進細胞凋亡的增強劑。利用熒光素(FITC)標記的TFAR19單克隆抗體為探針，對細胞凋亡過...

2016-10-08 圍觀215次 [應用] 高教職教

細胞凋亡檢測方法 Caspase-3活性的檢測

Caspase家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用，其中caspase-3為關鍵的執行分子，它在凋亡信號傳導的許多途徑中發揮功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞漿中，在凋亡的早期階...

2016-09-28 圍觀655次 [應用] 高教職教

細胞凋亡檢測方法——TUNEL法

TUNEL法[terminaldexynucleotidyltransferase(TdT)-mediateddUTPnickendlabeling](末端脫氧核苷酸轉移酶介導的dUTP缺口末端標記測定法)也稱DNA斷裂的原位末端標記法。細胞凋亡是指為維持內環境穩...

2016-09-26 圍觀652次 [應用] 高教職教

DNA片斷化檢測

細胞凋亡時主要的生化特征是其染色質發生濃縮,染色質DNA在核小體單位之間的連接處斷裂,形成50~300kbp長的DNA大片段,或180~200bp整數倍的寡核苷酸片段,在凝膠電泳上表現為梯形電泳圖譜(DNAladder...

2016-09-23 圍觀291次 [維修] 高教職教

線粒體膜勢能的檢測

線粒體在細胞凋亡的過程中起著樞紐作用，多種細胞凋亡刺激因子均可誘導不同的細胞發生凋亡，而線粒體跨膜電位的下降，被認為是細胞凋亡級聯反應過程中最早發生的事件，它發生在細胞核凋亡特征(染...

2016-09-22 圍觀381次 [維修] 高教職教

磷脂酰絲氨酸外翻分析（Annexin V法）

磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)正常位于細胞膜的內側，但在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2依賴性磷脂...

2016-09-21 圍觀632次 [維修] 高教職教

細胞凋亡的形態學檢測

細胞凋亡與壞死是兩種完全不同的細胞凋亡形式，根據死亡細胞在形態學、生物化學和分子生物學上的差別，可以將二者區別開來。細胞凋亡的檢測方法有很多，下面介紹幾種常用的測定方法。根據凋亡細...

2016-09-19 圍觀397次 [維修] 高教職教

實驗緩沖溶液的配置方法

(1)5TBE(tris-硼酸及EDTA)緩沖液的配制(1000ml)：材料：Tris54g，硼酸27.5g，0.5mol/LEDTA20ml方法：將pH調到8.0，定容至1000ml，4℃冰箱保存，用時稀釋10倍。(2)加樣緩沖液的配制：0.25%溴酚藍...

2016-09-18 圍觀1988次 [維修] 高教職教

DNA瓊脂糖凝膠電泳實驗原理和方法步驟

一、實驗目的學習和掌握瓊脂糖電泳法鑒定DNA的原理和方法。二、實驗原理瓊脂糖凝膠電泳是用于分離、鑒定和提純DNA片段的標準方法。瓊脂糖是從瓊脂中提取的一種多糖，具親水性，但不帶電荷，是一...

2016-09-14 圍觀1934次 [原理] 高教職教

微生物實驗中細菌計數的方法

細菌是一類形狀細短，結構簡單，多以二分裂方式進行繁殖的原核生物，是在自然界分布最廣、個體數量最多的有機體。在微生物實驗中，細菌計數的實驗方法主要有以下幾種：1、計數器測定法即用血細胞...

2016-09-13 圍觀506次 [應用] 高教職教

半定量RT-PCR的引物可以用于定熒光定量Q-PCR嗎？

經驗結論1、如果PCR產物很短，200bp以內，那么用SYBR做Q-PCR沒有問題的話，可以用。2、如果PCR產物比較長，那最好重新設計引物。3、如果用TaqMan做Q-PCR，那很可能需要重新設計引物。這個一般產...

2016-09-12 圍觀1262次 [維修] 高教職教

RT-PCR與qPCR所需要的引物區別

原理不同：熒光定量PCR實時監測與DNA結合的熒光染料激發的熒光;普通pcr通過檢測插入dna中熒光染色劑來看是否有目的片段。應要求：熒光定量對擴增片段有較高的要求，一般為100-300bp;普通PCR可以...

2016-09-09 圍觀5450次 [原理] 高教職教

簡并引物設計操作步驟

一、利用ncbi搜索不同物種中同一目的基因的蛋白或cDNA編碼的氨基酸序列因為密碼子的關系，不同的核酸序列可能表達的氨基酸序列是相同的，所以氨基酸序列才是真正保守的。首先利用NCBI的Entrez檢...

2016-09-08 圍觀501次 [維修] 高教職教

RT-PCR原理與實驗技術

一、知識背景：1、基因表達：DNARNAProtein單拷貝基因表達存在逐步放大機制，如一個蠶絲心蛋白基因104個絲心蛋白mRNA（每個mRNA存活4d，可以合成105個絲心蛋白）共合成109個絲心蛋白。因此單拷貝...

2016-09-07 圍觀334次 [原理] 高教職教

培養基靈敏度驗證方案

一、驗證目的通過對培養基的靈敏度驗證來增加無菌檢查的可信度二、原理不同種培養基內加入符合其生長條件的已知菌株做生長實驗，根據加入定量細菌的生長情況來評價改培養基靈敏度。菌量越少說明...

2016-09-05 圍觀804次 [維修] 高教職教

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