磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于細胞膜的內側，但在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2 依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力特異性結合。將Annexin-V進行熒光素(FITC、PE)或biotin標記，以標記了的Annexin-V作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。上海創賽科技提供BD抗體550589，PE Goat Anti-Mouse Ig ,商品編號：BD-550589-0.2 mg，詢價。
碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核紅染。因此將Annexin-V與PI匹配使用，就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區分開來。上海創賽科技提供碘化丙啶，Propidium Iodide ,商品編號：B11000383-10mg，價格172.2元。
方法
1 懸浮細胞的染色：
?、賹⒄Ｅ囵B和誘導凋亡的懸浮細胞(0.5~1×106)用PBS洗2次;
?、诩尤?00ul Binding Buffer和FITC標記的Annexin-V(20ug/ml)10ul;
?、凼覝乇芄?0min，再加入PI(50ug/ml)5ul，避光反應5min后，加入400ul Binding Buffer;
?、芰⒓从肍ACScan進行流式細胞術定量檢測(一般不超過1h)， 同時以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作為陰性對照。上海創賽科技提供異硫氰酸熒光素,FITC，3326-32-7 ,商品編號：B11000218-50mg，價格172.2元。
2 貼壁培養的細胞染色：
先用0.25%的胰酶消化，洗滌、染色和分析同懸浮細胞。
3 爬片細胞染色：
同上，最后用熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡進行觀察。
注意事項
1. 整個操作動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞。
2. 操作時注意避光，反應完畢后盡快在一小時內檢測。
CANSPEC品質提供的性能卓越，其優秀的品質滿足您不同實驗的多種需求，現貨，產品詳情，科學儀器，實驗室耗材，上海創賽,海量產品特價促銷中，歡迎來電咨詢!
