1. 取12.5-13.5dpc孕鼠，斷頸處死;
2. 將鼠腹面向上放置，70% 酒精潤濕、消毒腹部(防止腹毛飛揚，污染內臟及子宮)，剪開皮膚層、肌肉層，打開腹腔，將連接在子宮上的結締組織及脂肪剪去，將子宮取出，轉入無菌10cm平皿中;
3. 把平皿轉入超凈臺;
4. 用鑷子打開子宮壁，擠出鼠胚，并與胚外組織、胎盤等分離，除去鼠胚的頭、四肢及各種內臟(主要為肝臟、肺臟、心臟和腸胃等);
5. 將鼠胚移入另一新的無菌皿，用PBS洗三次;
6. 棄去PBS，用彎頭剪將鼠胚剪碎，加入PBS洗至溶液基本無色(1-4次);
7. 加入適量Trypsin-EDTA(0.25% )，體積約等于組織塊體積;上海創賽科技提供610769-35-2,Tris Borate EDTA buffer, for molecular biology, 10x, DNAse, RNAse and Protease free, pH 8.3 ,商品編號：C82-32733-1LT，價格763元。
8. 用滴管輕輕吹勻，室溫下消化1-10分鐘(或消化至溶液渾濁變粘)，加入與消化液等體積培養基，輕輕吹打混勻(5-10次)，靜置;
9. 沉降后將上部溶液輕輕吸出，轉入離心管中。
10. 將細胞懸液管離心(1000轉5分鐘);
11. 棄去上清，向沉淀中加入適量培養基，輕輕吹打重懸，將其分種至10 cm細胞培養皿，補加適量培養基，作標簽(ME-0;注意：若凍存，則可以使用復蘇后的0代ME制作Feeder;若直接使用則最好不用0代ME細胞做Feeder，要傳到一代以后再用來制作Feeder比較好)，轉入培養箱培養;
12. 視細胞生長情況換液(一般3天換液一次)，若細胞已長滿，則凍存，或者1：3-5傳代(視細胞疏密而定)，放入培養箱繼續培養(此后不用再換液);1-5代的ME細胞均可用來制作Feeder。
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