1. 提前制備好相應數量的Feeder;
2. 準備37-39℃的熱水，從液氮罐中取出所需凍存管(凍存細胞)，迅速投入熱水中，迅速劇烈搖動直至凍存液全部融化;上海創賽科技提供細胞凍存管，Freezing Tubes，商品編號：C81-FCT002005-0.5ml，錐形底,已消毒 5000支/箱，價格3272元。
3. 轉入無菌間，1000轉/分鐘離心5-10分鐘;
4. 棄上清，加入1 ml ES培養液輕輕吹打重懸，轉入鋪有飼養層細胞的培養皿中(凍存前細胞來自多大的培養皿，復蘇時就用相應大小的培養皿)，補加適量培養液;上海創賽科技提供9.0CM一次性細胞培養皿，平底滅菌，適合細胞貼壁生長 ，商品編號：C81-TCD010090-500個/箱，價格787.5元。
5. 轉入培養箱培養，次日換液;此后每24小時換一次液，每48小時傳一次代(視生長情況)。
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