一、驗證目的
通過對培養基的靈敏度驗證來增加無菌檢查的可信度
二、原理
不同種培養基內加入符合其生長條件的已知菌株做生長實驗，根據加入定量細菌的生長情況來評價改培養基靈敏度。菌量越少說明培養基靈敏度越高。
三、儀器設備
無菌室（操作間凈化級別小于10000級，局部凈化小于100級，室溫18-26℃，相對濕度40-60%）、恒溫培養箱（30-35℃）、恒溫培養箱（20-25℃）、高壓滅菌器、干烤箱（250℃）、相差顯微鏡等。
培養基：需氣菌、厭氧菌培養基（硫乙醇酸鹽培養基）；真菌培養基（改良馬丁培養基）上海創賽科技提供改良馬丁培養基，商品編號：C015222-250g，價格80元。
測試菌種：金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、白色念珠菌、生孢梭菌。上海創賽科技提供金黃色葡萄球菌顯色培養基，BR ，商品編號：D16-1028481-500g，詢價。
四、驗證實施
1、培養基配置：
分別稱取硫乙醇酸鹽培養基7.5克，改良馬丁培養基7.0克，分別加250ml蒸餾水，熱溶解，分裝10ml/管，高壓滅菌116℃，20分鐘。上海創賽科技提供液體硫乙醇酸鹽培養基，商品編號：C015190-250g，價格115元。
2、測試均的培養：
在無菌操凈臺內，分別取金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、生孢梭菌菌液少量，接種在硫乙醇酸鹽流體培養基（10ml/管）中，在30-35℃培養24小時；取白色念珠菌菌液少量，接種在改良馬丁培養基中，在20-25℃培養24小時，此時的培養液稱為原菌液。上海創賽科技提供蛋白酶（枯草桿菌），9014-01-1，BR,150u/mg，商品編號：D23-RM1036-1g，價格480元。
3、測試菌計數：采用原菌培養液直接稀釋、計數板計數法
①分別取已經培養好的原菌液1ml，用生理鹽水稀釋10倍
②用一片干凈的蓋玻片在一干凈計數玻片上
③吸少量含菌培養液接觸蓋玻片的邊緣
④在相差顯微鏡400倍下觀察，并且按一小方塊所見的每一個細菌大約相當2x107細菌/ml計算細菌濃度。
4、原菌液稀釋：
將上述原菌液根據細菌計數結果，分別用生理鹽水稀釋至10~100個菌/ml。
5、靈敏度實驗：
分別將4稀釋菌液1ml接種到1配置的10ml/管培養基中，每種菌液接種3管培養基，以未接種的培養基為陰性對照，按規定的條件培養5天，并逐日記錄。上海創賽科技提供念珠菌BCG瓊脂基礎，Candida BCG Agar Base ，商品編號：BD-283510-500g，價格3070.06元。
6、結果判定：
一每種菌液接種的培養基不得少于2管呈陽性。即該培養基的靈敏度符合要求。
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