方法一
1、稀釋。我們要留血漿(肝素鈉抗凝的采血管采的血,5~6ml),所以分離、取出血漿后加入和紅細胞等體積的生理鹽水,一般3ml左右,混勻。上海創賽科技提供肝素鈉,Heparin sodium salt,商品編號:B11000262-1g,價格69.3元。
2、分離液,不在乎體積有多少,主要是高度,如果離心管很粗的話,就要多加一些,細一點的離心管就可以少加一些,一般高度要超過3cm。
3、分離血來源,成人外周血比較好分,臍血和胎盤血不好分。當然,發生溶血和凝血的話就更難分了。
4、血的保存,采血后不要放到4度冰箱(當然更不能凍啦),常溫,避光即可。從采血到分離不要超過12個小時,不然效果也不好。
5、離心速度和時間。不同的離心機,肯定轉速不一樣的,實驗室一般用水平離心機2500轉,20分鐘,基本上沒有紅細胞了,淋巴細胞也很多。
6、淋巴細胞分離液的保存不必放在4度,常溫即可,無論是否開封了的。以往經驗,分離液一放到4度后,無論復溫的效果如何,分離的效果都沒以前好。上海創賽科技提供淋巴細胞分離液,BR ,商品編號:D16-1013112-250ml,詢價。
方法二
1.用0.85%生理鹽水對倍稀釋抗凝血液標本。
2.取淋巴細胞分離液3-4ml于干凈試管中。
3.往淋巴細胞分離液上層緩緩加入2倍于分離液體積的稀釋外周血量。
4.2000-2500RPM轉速離心15分鐘。上海創賽科技提供淋E23-TD4M血細胞洗滌離心機 ,商品編號:E23-TD4M-臺,詢價。
5.用吸管吸取中層白色渾濁液于eppendorf管-20℃保存待用。
注意事項
1、取血的質量很重要,分離界面清楚的總是血樣質量好的),用Hanks對倍稀釋!分離液一般是稀釋血量的1/2!
2、離心時間很有關系各實驗室離心機不同!
3、破碎紅細胞用雙蒸水少于一分鐘。
4、試管的干凈程度也有關系的。
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