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高效毛細管電泳的基本原理
高效毛細管電泳(HighPerformanceCapillaryElectrophoresis,HPCE)和一般電泳法的區別在于使用毛細管柱。在熔融石英毛細管內壁覆蓋一層硅氧基(Si-O)陰離子,由于吸引了溶液中的陽離子,由此在毛細...
2016-12-23
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1518
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[原理]
高教
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聚丙烯酰胺凝膠電泳
1、聚丙烯酰胺的合成和結構聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺(Acrylamide簡寫為Acr)和交聯劑甲叉雙丙烯酰胺(N,N1-methylene-bisacrylamide,簡寫Bis)在催化劑的作用下,聚合交聯成含有酰胺基側鏈的脂...
2016-12-22
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1894
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電泳技術的種類
電泳技術的種類很多。根據有無固體支持物,可分為兩大類,即界面電泳和區帶電泳。界面電泳是指在溶液中進行的電泳,沒有固體支持物。當溶液中有幾種帶電粒子時,通電后,由于不同粒子泳動速度不...
2016-12-21
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1047
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[原理]
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電泳技術Techniques in Electrophoresis
一、基本概念目前電泳技術已被廣泛應用于蛋白質、核酸和氨基酸等物質的分離和鑒定。何謂電泳?在溶液中,帶電粒子在外加電場的作用下,向相反電極方向移動的現象,稱為電泳。電泳時不同的帶電粒子...
2016-12-20
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親和層析原理(Affinity Chromatography)
親和層析法是近年來廣為重視并得到迅速發展的提純、分離方法之一。許多物質都具有和某化合物發生特異性可逆結合的特性。例如:酶與輔酶或酶與底物(產物或競爭性抑制劑等),抗原與抗體,凝集素與...
2016-12-19
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1364
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凝膠過濾技術(Gel filtration technology)
凝膠過濾是利用具有一定口徑范圍的多孔凝膠的分子篩作用對生物大分子進行分離的層析技術。當樣品隨流動相經過由凝膠組成的固定相時,分子量大的物質不能擴散進入凝膠顆粒內部,于是隨流動相流經...
2016-12-16
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1071
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離子交換層析基本操作方法
離子交換層析(Ion-exchangeChromatography)離子交換層析是利用離子交換劑對需要分離的各種離子具有不同的親和力(靜電引力)而達到分離目的的層析技術。離子交換層析的固定相是離子交換劑,流動相...
2016-12-14
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4535
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分配層析原理 Distribution Chromatography
分配層析是利用混合物中各組分在兩相中分配系數不同而達到分離目的的層析技術,相當于一種連續性的溶劑抽提方法。在分配層析中,固定相是極性溶劑(例如水、稀硫酸、甲醇等)。此類溶劑能和多孔的...
2016-12-13
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15208
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[原理]
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吸附層析技術的簡介及原理
層析技術是近代生物化學實驗中常用的分析方法。任何層析過程都是在兩個相中進行的。一是固定于支持物上的固定相,另一是流經固定相的流動相,由于樣品中各組分理化性質(如溶解度、吸附能力、分子...
2016-12-12
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5577
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[原理]
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明美CCD顯微鏡相機對相差顯微鏡進行測試
原理:活細胞和未染色的生物標本,因細胞各部細微結構的折射率和厚度的不同,光波通過時,波長和振幅并不發生變化,僅相位發生變化(振幅差),這種振幅差人眼無法觀察。而相差顯微鏡通過改變這種...
2016-12-09
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751
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[案例]
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幾種常用的國產分光光度計
(一)721型分光光度計(圖2-5)這是一種采用光電管為受光器的較高級可見光分光光度計。由穩壓電源供電的光源燈發出穩定的白光。如圖2-5所示。光線經反射鏡投入狹縫,再經準直鏡反射進入棱鏡,在棱鏡...
2016-12-08
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9597
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分光光度計的結構原理
不論光度計(Photometer)、比色計(Colorimeter)還是分光光度計(Spectrophotometer),其基本結構原理都是相似的,都由光源、單色光器、狹縫、吸收杯和檢測器系統等部分組成(圖2-3)。(一)光源一個良...
2016-12-06
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2117
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[原理]
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分光光度法Spectrophotometry基本原理
分光光度法Spectrophotometry基本原理光線是高速運動的光子流,也是具有波長和頻率特征的電磁波。光子的能量與頻率成正比,與波長成反比。肉眼可見的光線稱為可見光??梢姽庵徽茧姶挪ㄗV的很窄部...
2016-12-05
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929
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[原理]
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生物大分子制備原理
一、透析和超濾(DialysisandUltrafiltration)1、透析是利用蛋白質等生物大分子不能透過半透膜而進行純化的一種方法。脫鹽透析是應用最廣泛的一種透析方法。將含鹽的生物大分子溶液裝入透析袋內,...
2016-12-01
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808
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[原理]
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以蛋白質為例的分離純化實驗
鹽析(Saltingout)鹽析方法是蛋白質和酶提純工作中應用最早,至今仍廣泛應用的方法。其原理是蛋白質在高濃度的鹽溶液中,隨著鹽濃度的逐漸增加,蛋白質表面的電荷被中和,水化膜被破壞,蛋白質分...
2016-11-30
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574
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生物大分子的基本制備技術
生物大分子的基本制備技術生物大分子的制備過程包括選材、細胞破碎和細胞器分離、生物大分子提取純化、以及樣品濃縮干燥和儲存等。生物大分子的制備是一項十分細致的工作,既要設法得到它們的純...
2016-11-29
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512
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核酸的鑒定、保存與應用
(一)核酸的鑒定1.濃度鑒定核酸濃度的定量鑒定可通過紫外分光光度法與熒光光度法進行。(1)紫外分光光度法:紫外分光光度法是基于核酸分子成分中的堿基均具有一定的紫外線吸收特性,最大吸收波長在...
2016-11-28
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1385
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高教
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核酸分離與純化的技術路線設計
(一)核酸的釋放正常情況下,無論是DNA還是RNA均位于細胞內,因此核酸分離與純化的第一步就是破碎細胞、釋放核酸。細胞的破碎方法非常多,包括機械法與非機械法兩大類。機械法又可分為液體剪切法...
2016-11-25
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1132
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高教
職教
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核酸分離與純化的設計與原則
細胞內的核酸包括DNA與RNA兩種分子,均與蛋白質結合成核蛋白(nucleoprotein)。DNA與蛋白質結合成脫氧核糖核蛋白(deoxyribonucleoprotein,DNP),RNA與蛋白質結合成核糖核蛋白(ribonucleoprotein...
2016-11-24
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523
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[原理]
高教
職教
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細胞因子的檢測方法
細胞因子(cytokine)是由細胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物質的統稱。在免疫應答過程中,細胞因子在免疫調節、炎癥應答、腫瘤轉移等生理和病理過程中起重要作用。細胞因子的檢測不僅是基礎免...
2016-11-23
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609
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[應用]
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職教
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H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)滲入法實驗步驟
一、操作方法1、培養液中按1%的體積加雙抗(含青霉素1萬U/ml,鏈霉素0.01g/ml)及肝素液(含肝素100U/ml)。用3.5%NaHCO3液調pH值為7.2~7.4,然后加滅活的小牛血清,使濃度為20%。再加PHA(50U~75U/m...
2016-11-22
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1506
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[應用]
高教
職教
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細胞增殖檢測:H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)滲入法
一、實驗原理:T細胞、B細胞表面具有識別抗原的受體和有絲分裂原受體,在特異性抗原刺激下可使相應淋巴細胞克隆發生增殖。植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA)、抗CD2和抗CD3McAb作為多克隆刺激劑...
2016-11-22
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1075
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[應用]
高教
職教
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血清蛋白瓊脂糖凝膠電泳原理
瓊脂糖(agarose)是經過挑選,以質地較純的瓊脂(agar)作為原料而制成的。瓊脂在化學上是由瓊脂糖和瓊脂膠組成的復合物。瓊脂膠是一含有硫酸根和羥基的多糖,它具有離子交換性質,這種性質會給電泳...
2016-11-18
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794
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[原理]
高教
職教
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血清蛋白瓊脂糖凝膠電泳實驗操作方法
【試劑】1、蘇丹黑染色液將蘇丹黑B加到無水乙醇中至飽和,搖蕩使乙?;?。用前過濾。上海創賽科技提供4197-25-5,蘇丹黑B,GR,商品編號:D16-1032969-100G,價格431元。2、巴比妥緩沖液稱取巴比...
2016-11-18
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932
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[應用]
高教
職教
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多因素值得注意 如何讓你的qPCR更完美
RNA抽提關于RNA抽提,各個學術團體和科研機極使用不同的操作流程,但下列因素是值得注意的事情:1、不同方式保存的及不同形態的樣品的RNA提叏方法有所差別;2、分離總RNA,或是大小片殌RNA時提叏方...
2016-11-17
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611
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[應用]
高教
職教
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規范操作 避免PCR反應污染方法
PCR反應常見的污染表現為:標本間交叉污染,PCR試劑污染、PCR擴增產物污染以及實驗中兊隆質粒的污染。為了有效地避克這些污染,使得實驗的結果更準確、更直觀:1.合理分隔實驗室將樣品的處理、配...
2016-11-16
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717
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[應用]
高教
職教
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實時熒光定量PCR技術
實時熒光定量PCR技術(Real-timeqPCR)是一種在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,最后通過特定數學原理對未知模板進行定量分枂的方法。因其定量準確、特異性強、操...
2016-11-11
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975
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[方案]
高教
職教
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ES細胞的凍存方法
操作方法1.常規方法將細胞消化成單細胞懸液;2.轉入試管,1000轉/分鐘離心5分鐘;3.配適量凍存液(為含10%二甲亞砜(DMSO),10%FBS的DMEM培養液);上海創賽科技提供67-68-5,二甲亞砜,DimethylSulfo...
2016-11-09
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515
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[維修]
高教
職教
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飼養層細胞(Feeder)的制備
飼養層細胞(Feeder)的制備注:含10ug/ml絲裂霉素C的DMEM血清培養基(FBS占10%)(實驗室所用MMC為10mg/mL,Calbiochem)1.棄去細胞培養皿中的培養液,加入適量含10ug/ml絲裂霉素C的培養基(DMEM+10%F...
2016-11-03
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3244
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[維修]
高教
職教
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影響細胞生長的幾點因素
影響細胞生長的幾點因素,摘要:細胞在體外進行培養,失去了機體的調節和控制,因此,除滿足營養的要求外,還必須使細胞生存環境晝接近活體的環境.外環境的培養條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響...
2016-10-11
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481
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[原理]
高教
職教
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如何搞定免疫熒光
免疫熒光是標記免疫技術發展最早的一種,它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術,通過將抗體與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。免...
2016-10-10
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264
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[應用]
高教
職教
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微載體細胞培養法
1.微載體選擇:先用利用三種小量微載體做培養實驗,觀察細胞在一定時間內細胞的吸著率和計算細胞數,以得到最大量細胞為佳。2.水化:稱一定量的微載體放入容器中,按每克微...
2016-09-30
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515
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高教
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第34屆中國質譜學會學術年會開幕
2016年9月10日,由中國質譜學會主辦、中國科學院青海鹽湖研究所等聯合承辦的第34屆中國質譜學會學術年會暨全國會員代表大會在青海省西寧市隆重開幕。本屆會議為期3天(9月10日-12日),包含22個大...
2016-09-12
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649
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[動態]
高教
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如何閱讀分析質粒圖譜
一個合格質粒的組成要素包括:1.復制起始位點Ori即控制復制起始的位點。原核生物DNA分子中只有一個復制起始點。而真核生物DNA分子有多個復制起始位點。2.抗生素抗性基因可以便于加以檢測,如Amp...
2016-09-01
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743
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[維修]
高教
職教
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單克隆與多克隆抗體的區別
抗體的產生把某一抗原免疫某種動物而得到單抗或多抗。如果用經免疫過的動物的脾細胞獲得雜交瘤細胞,則得到單克隆抗體,如果用動物的血清,則得到多克隆抗體。但從理論上說,這些抗體都應針對抗...
2016-08-29
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872
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[原理]
高教
職教
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細胞凍存與復蘇操作方法
細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一...
2016-08-24
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321
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[維修]
高教
職教
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細胞傳代培養的原理及實驗步驟
傳代培養是指需要將培養物分割成小的部分,重新接種到另外的培養器皿(瓶)內,再進行培養的過程。對單層培養而言,80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。傳代培養中的細胞傳代培養(subcultu...
2016-08-23
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2220
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[維修]
高教
職教
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ELISA試劑盒有哪些優點與服務承諾?
ELISA試劑盒有哪些優點與服務承諾?elisa試劑盒的優點:一、高效、靈敏、特異的抗體;二、穩定的重復性和可靠性;三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;四、適用血清、血漿、組織勻漿液...
2016-08-05
圍觀
552
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[簡訊]
基教
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細胞培養實驗——無菌操作環境
組織培養(Tissueculture)是在體外模擬體內生理環境,在無菌、適當溫度和一定營養條件下。使從體內取出的組織生存、生長繁殖和傳代,并維持原有的結構和功能特性。廣義的組織培養與體外培養同義。...
2016-08-05
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781
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[維修]
高教
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氘代內標在法庭毒物分析的應用
當前,我國法庭毒物分析實驗室的質量控制體系發展愈發完善,要求也越來越高。同時,隨著司法體制的逐步健全,公民證據意識的增強,進而越來越關注案件鑒定結論的質量。因此,毒物分析的質量控制...
2016-08-01
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1102
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[應用]
高教
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