分配層析是利用混合物中各組分在兩相中分配系數不同而達到分離目的的層析技術，相當于一種連續性的溶劑抽提方法。
在分配層析中，固定相是極性溶劑(例如水、稀硫酸、甲醇等)。此類溶劑能和多孔的支持物(常用的是吸附力小、反應性弱的惰性物質如淀粉、纖維素粉，濾紙等)緊密結合，使呈不流動狀態;流動相則是非極性的有機溶劑。分配系數(a)是指在一定溫度和壓力條件下物質在固定相和流動相兩部分濃度達到平衡時的濃度比值。上海創賽科技提供9005-84-9，可溶性淀粉，Starch soluble，藥用級，商品編號：C16-S10416-500g，價格40元。
在層析過程中，當有機溶劑流動相流經樣品點時，樣品中的溶質便按其分配系數部分地轉入流動相向前移動。當經過前方固定相時，流動相中的溶質就會進行分配，一部分進入固定相。通過這樣不斷進行的流動和再分配，溶質沿著流動方向不斷前進。各種溶質由于分配系數不同，向前移動的速度也各不相同。分配系數較大的物質，由于分配在固定相多些，分配在流動相少些，溶質移動較慢;而分配系數較小的物質，移動速度較快。從而將分配系數不同的物質分離開來。
支持物在分配層析中起支持固定相的作用，根據其使用方式也分柱層析和薄層層析兩種。用濾紙做支持物的紙層析法是最常用的分配層析。實驗中應選用厚度適當、質地均一、含金屬離子(鈣、銅、鎂、鐵等)盡量少的濾紙為支持物。濾紙中吸附著的水(約含20-22%)是常用的固定相。酚、醇是常用的流動相。展層方法多可采用垂直型(圖3-1)，也可采用水平型。把欲分離的樣品點加于紙的一端，使流動相經此移動，這樣在兩相間就發生分配現象。根據樣品中各組中的分配系數不同，它們就逐漸集中于紙上不同的部位。各組分在濾紙上的移動速度可用遷移率(Rf)來表示。上海創賽科技提供無水醋酸銅，Cupric Acetate Anhydrous，99.999% metals basis，142-71-2 ，商品編號：C16-C10692-25g，價格1487元。
在紙層析中，Rf值的大小主要取決于該組分的分配系數。分配系數大者移動速度慢，其 Rf值也小;反之分配系數小者移動速度快Rf值也大。因為每種物質在一定條件下對于一定的溶劑系統，其分配系數是一定的，Rf值也恒定。因此可以根據Rf值對分離的物質進行鑒定。
有時幾種成分在一個溶劑系統中層析所得Rf 值相近，不易分離清楚。這時可以在第一次層析后將濾紙吹干逆轉90o角，再采用另一種溶劑系統進行第二次層析，往往可以得到滿意的分離效果。這種方法稱為“雙向紙層析法”(圖3-2)。
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