層析技術是近代生物化學實驗中常用的分析方法。任何層析過程都是在兩個相中進行的。一是固定于支持物上的固定相,另一是流經固定相的流動相,由于樣品中各組分理化性質(如溶解度、吸附能力、分子形狀、分子所帶電荷的性質和數量、分子表面的特殊基團、分子量等)不同,表現出對固定相和流動相的親和力也各不相同。當混雜物通過多孔的支持物時,它們受固定相的阻力和受流動相的推力也不同,各組分移動速度各異并在支持物上集中分布于不同的區域,從而使各組分得以分離。
吸附作用是指某些物質能夠從溶液中將溶質濃集在其表面的現象。吸附劑吸附能力的強弱與被吸附物質的化學結構、溶劑的本質和吸附劑的本質有關。當改變吸附劑周圍溶劑成分時,吸附劑對被吸附物質的親和力便發生變化,使被吸附物質從吸附劑上解脫下來,這一解脫過程稱為“洗脫”或“展層”。
吸附層析是把吸附劑裝入玻璃柱內(柱層析法)或鋪在玻璃板上(薄層層析法)。由于吸附劑的吸附能力可受溶劑影響而發生改變,樣品中的物質被吸附劑吸附后,用適當的洗脫液沖洗,改變吸附劑的吸附能力,使之解吸,隨洗脫液向前移動。當解吸下來的物質向前移動時,遇到前面新的吸附劑又重新被吸附。此被吸附的物質再被后來的洗脫液解脫下來。經如此反復的吸附—解吸—再吸附—再解吸的過程,物質即可沿著洗脫液的前進方向移動。其移動速度取決于吸附劑對該物質的吸附能力。由于同一吸附劑對樣品中各組分的吸附能力不同,所以在洗脫過程中各組分便會由于移動速度不同而逐漸分離出來,這就是吸附層析的基本過程。上海創賽科技提供298-00-0|甲基對硫磷標準溶液,Parathion-methyl,500μg/ml,溶劑:氯仿,商品編號:C16-P10773-1.2ml,價格155元。
實驗中常用的固體吸附劑有氧化鋁、硅酸鎂、磷酸鈣、氫氧化鈣、活性鈣、蔗糖、纖維素和淀粉。常用的洗脫液有乙烷、苯乙醚、氯仿,以及乙醇、丙酮或水與有機溶劑形成的各種混合物。吸附層析通常用于分離脂類、類固醇類、類胡羅卜素、葉綠素以及它們的前體等非極性和極性不強的有機物。上海創賽科技提供67-64-1,丙酮,Acetone,HPLC ,商品編號:C28-A1213-4L,價格700元。
值得提出的是,幾乎所有的溶質對于所有的層析介質,即使是惰性的物質都有一定限度的吸附力,除吸附層析本身之外,吸附作用還或多或少地存在于所有其他類型的層析中。
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