凝膠過濾是利用具有一定口徑范圍的多孔凝膠的分子篩作用對生物大分子進行分離的層析技術。當樣品隨流動相經過由凝膠組成的固定相時，分子量大的物質不能擴散進入凝膠顆粒內部，于是隨流動相流經顆粒之間的狹窄空隙，首先洗脫出層析柱;分子量小的物質可以擴散進入凝膠顆粒內部，比較大分子量物質流經的載面積寬，流動速度慢，而后被洗脫出來。這樣分子量大和分子量小的物質便得以分離(圖3-7)。即固定相的網孔對不同分子量的樣品成分具有不同的阻滯作用，使之以不同的速度通過凝膠柱，從而達到分離的目的，凝膠過濾又因此得名“分子篩層析”和“凝膠排阻層析”。
在實際工作中，對于同一個凝膠柱來說，各種分子量的物質有其固定的洗脫體積。因此，準確掌握凝膠柱的一些基本因素是十分有益的。上海創賽科技提供7320-34-5，焦磷酸鉀，AR ，商品編號：D16-1005238-500g，價格52元。
凝膠柱的總體積(Vt)：凝膠顆粒之間空隙的體積(外水體積Vo)、凝膠顆粒網眼內的體積(內水體積Vi)和凝膠顆?；|本身的體積(Vr)的總和(圖3-8)。
Vt=Vo+Vi+Vr
如果被分離的物質分子量很大，完全不能進入網孔內，那末它從柱上洗脫下來(小樣品時以洗脫峰為準)所需的洗脫液體積(Ve)就等于顆粒間隙的體積(Vo)，即Ve=Vo。如果被分離物質的分子量極小，可以非常自由的通過網孔即進出凝膠顆粒，那么它的洗脫液體積就應當等于顆粒內和顆粒間隙體積的總和(Ve=Vo+Vi)。至于分子量位于上兩者之間的，其洗脫體積便位于Vo 和Vo+Vi 之間?？梢?，分子量大小不同的物質，其洗脫體積不同，從而可以用于物質的分離。另外，如果在有已知分子量的標準物質做對照的條件下，就可以根據洗脫體積來估計待測物質的分子量(圖3-9)。
Sephadex G-200(超細顆粒)柱2.6×70cm，洗脫液：0.05mol/L 磷酸鉀緩沖液，內含0.1 mol/LNaCl及0.02%NaN3，流速1ml/cm2/hr。
1、過氧化氫酶(210 000)
2、醛縮酶(158 000)
3、牛血清蛋白(67 000)
4、卵清蛋白(43 000)
5、糜蛋白酶原A(25 000)
6、核糖核酸酶A(13 700)
凝膠過濾除用于生物大分子的分離、分子量測定外，還可用于提純、脫鹽和復合物組分成分分析等。上海創賽科技提供9003-05-8，聚丙烯酰胺，Polyacrylamide，非離子型，分子量：200萬-1400萬，商品編號：C16-P10674-500g，價格68元。
適用于做凝膠過濾的材料有多種，主要有葡聚糖凝膠顆粒(Sephadex G)、瓊脂糖凝膠顆粒(Sepharose)和聚丙烯酰胺凝膠顆粒(Bio Gel)等?，F將這些凝膠顆粒的種類和某些應用數據列于表3-2。
不論何種凝膠，其共同特點是化學性質穩定，不帶電，與待分離物質吸附力很弱，不影響待分離物質的生物活性，樣品得率可達100%，凝膠過濾尚有操作簡便，凝膠柱不經特殊處理便可反復使用等特點，是近年來被廣泛應用的生化技術之一。上海創賽科技提供卵清蛋白，Albumin from chicken egg white，Grade II，9006-59-1，商品編號：B11000011-10g，價格22.4元。
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