抗體的產生
把某一抗原免疫某種動物而得到單抗或多抗。如果用經免疫過的動物的脾細胞獲得雜交瘤細胞,則得到單克隆抗體,如果用動物的血清,則得到多克隆抗體。但從理論上說,這些抗體都應針對抗原來自的動物,例如如果用人蛋白抗原免疫小鼠,則這些抗體為鼠抗人。由于一個大蛋白分子表面具有多種抗原決定簇,因此,免疫動物后,這些不同的決定簇分別誘導動物產生不同的抗體,每種抗體的特異性不同。上海創賽科技提供BD抗體550041,PE Mouse Anti-Human CD30,商品編號:BD-550041-20 µl,詢價。
單抗是有單個細胞起源的細胞克隆分泌的,所以只針對蛋白抗原的單一抗原決定簇,而多抗是有多個不同克隆的B細胞產生的,是多種細胞的混合物,但其中的每一種抗體也只是針對一種決定簇。多抗混合物中的每一抗體與蛋白抗原結合的能力是不同的,因此用多抗做實驗與用單抗可有其優勢,那就是能確??贵w與抗原結合從而顯示抗原信息。但也有其缺點,那就是交叉反應,往往造成假陽性。從理論上說,用人抗原誘導產生的抗體應只能用于人類,但由于動物種屬之間,特別是相近的動物之間,如人與猩猩,大鼠與小鼠存在著同源性,導致抗體的交叉反應,即用一種動物抗原誘導產生的抗體也可與其它一些動物的抗原反應。
由于單抗只針對單一抗原決定簇,因此,其能導致的交叉反應很少,而多抗是混合物,導致的交叉反應就多一些。但并不是向你所認為的那樣,多抗可與所有種屬動物反應。在選擇抗體時,如果你標本來源于人,當然應選用如鼠抗人或兔抗人等。如果抗體來源確實不清,那應該先預實驗。選擇已知陽性標本,在充分設置陰性對照的前提下,用此抗體染色,看能否顯示陽性結果。
抗原的區別
可以引起機體產生抗體的分子結構叫做抗原決定簇,也稱為抗原表位。一個抗原可以有許多不同的抗原決定簇,因此,機體也可以產生多種不同的抗體。由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅識別某一特定抗原表位的抗體,稱為單克隆抗體。而由多個B淋巴細胞克隆產生的,受到多種抗原決定簇刺激并可以與多種抗原表位結合的抗體就是多克隆抗體。
制備的區別
經過特定抗原處理過的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞通過細胞融合的方法得到雜交瘤細胞,經HAT培養基篩選、ELISA檢測效價后就得到陽性克隆株,最后進行細胞培養或將細胞注入到動物(一般為balb/c小鼠)腹腔中用腹水培養,收集上清/腹水純化后就能得到單克隆抗體。而制備多克隆抗體就沒有單克隆抗體繁瑣,只需將抗原(純度越高越好)直接注入到動物體內進行免疫,經過3~4次免疫,ELISA測其效價合格后,收集血液離心得到上清,純化后即能得到多克隆抗體。因此多抗制備的周期就比單抗制備的短,首次制備價格也比單抗要低。
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