一、操作方法
1、培養液中按1%的體積加雙抗(含青霉素1萬U/ml，鏈霉素0.01g/ml)及肝素液(含肝素100U/ml)。用3.5%NaHCO3液調pH值為7.2~7.4，然后加滅活的小牛血清，使濃度為20%。再加PHA(50U~75U/ml)，無菌分裝于培養瓶內，每瓶1ml。上海創賽科技提供57-92-1，鏈霉素(標準品)Streptomycin，商品編號：C84-9623-200mg，價格77元。
2、無菌操作采血，并以肝素抗凝，同時進行白細胞計數及分類計數。
3、取0.1ml抗凝血，加入到含1ml培養液的培養瓶中，每個血樣接2~3個培養瓶。如果以血漿或分離的淋巴細胞代替全血，加入培養瓶中更好。上海創賽科技提供人抗凝血酶3Elisa試劑盒，Human Antithrombin III，AT III ELISA Kit，商品編號：LH-E10215HU-96T，價格1700元。
4、37℃培養72h，在培養結束前16h～24h，每瓶加入3H-TdR 1uci。
5、培養結束后，將培養物移到離心管內，用3%冰醋酸6ml，分兩次沖洗培養瓶，并將沖洗液也裝入離心瓶中，2 000r/min離心10min，去上清。沉淀再用3%冰醋酸洗滌一次，同樣離心去上清。
6、在沉淀中加30%H2O2液一滴，85℃水浴15min，待溶液呈無色時，再加甲酸0.5ml，繼續加熱(85℃)30min，使沉淀物完全消化溶解。
7、將消化溶解的液體移入測樣杯內，用紅外燈或80℃熱空氣烘烤至液體體積少于0.1ml，加閃爍液5ml，用液體閃爍液計數器測其脈沖數。上海創賽科技提供132-98-9，青霉素V鉀，Penicillin V potassium salt，分析標準品，商品編號：C16-P11203-100mg，價格395元。
8、第5~7步驟制備閃爍液樣品也可以采用濾膜法制備。即：培養結束后，將培養液移入離心管，2000r/min離心10min，棄上清，沉淀用生理鹽水洗滌一次、再離心。將沉淀移至濾膜上(注意將沉淀全部移入)，減壓抽濾，并依次以10ml生理鹽水、5ml 5%三氯醋酸(若有帶色物質，用30%H2O2液脫色)和3ml無水乙醇抽濾。取出濾膜，60℃~80℃烘干，然后將濾膜放入裝有5ml的閃爍液中(貼細胞的面朝上)，用液體閃爍液計數器檢測。
二、結果判定
以液體閃爍計數器測定每分的脈沖數cpm。取各管測定讀數的平均值，即為0.1ml血樣的脈沖數。全血檢測的脈沖數，再按血樣淋巴細胞計數結果，校正成每百萬淋巴細胞的脈沖數(cpm/106淋巴細胞)。也可以刺激指數(SI)表示試驗結果。為此須在培養時，設同樣數量的不加PHA的對照培養瓶，試驗管脈沖數與對照管脈沖數之比，即為刺激指數。
三、注意事項
1、血樣與培養基比例一般在1：10~1：30為宜。
2、培養細胞時，可放入CO2培養箱中培養，也可在普通溫箱進行培養，但一定要把蓋子擰緊，否則結果差別較大。
3、以SI表示結果時，一定要設置相同數量培養管的對照(即不加PHA)。而以cpm絕對值表示(cpm/106淋巴細胞)則可以不用設對照管。因為對照的cpm與本底比較接近，不同樣品之間的少許差別也不易確定其意義。
4、閃爍液的容水量很低，所以在加入閃爍液之前必須烘干。但加入一定量的醇類(如無水乙醇)，則可容納少量的處理后所殘留的水分，但也仍需烘至接近干燥的程度，否則將發生渾濁而無法測定。據報道，如果閃爍液中加入1/3的異辛基苯氧聚乙氧乙醇(TritonX-100)，其容水量可達15%，消化溶解后的樣品，不必烘干，即可添加閃爍液測定。
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