生物大分子的基本制備技術
生物大分子的制備過程包括選材、細胞破碎和細胞器分離、生物大分子提取純化、以及樣品濃縮干燥和儲存等。生物大分子的制備是一項十分細致的工作,既要設法得到它們的純品,又要努力保持其生物活性。有時制備一個純度較高的蛋白質、酶或核酸,需要付出較長時間的艱苦勞動。生物大分子制備方法的選擇是以生物大分子的理化性質為依據的(表1-1)。對于理化性質不同的生物大分子,所選用的分離提純方法也不相同上海創賽科技提供9025-64-3| 脫氧核糖核酸酶Ⅱ(豬脾)Deoxyribonuclease I(Bovine pancrease)BR,1000u/mg,Type V ,商品編號:D23-RM1050-30KU,價格1120元。
生物大分子的理化性質與分離純化方法的選擇
在生物大分子的制備過程中,為隨時了解所用方法和條件的效果,以及提取物質的純度和得率,必須對所提取的生物大分子進行追蹤分析鑒定。因此在提純以前,必須建立對所提取生物大分子相應的分析鑒定方法。
以蛋白質的分離純化過程為例,在分離、純化過程中,每進行一個步驟都需對所得樣品的比活性(總活性/總蛋白)、得率(每一步驟總活性與第一步總活性的百分比,設開始時的總活性為100%)和提純倍數(每一步驟比活性與第一步比活性的比值,設開始時為1)進行測定。一般認為所得樣品的比活性和得率越高以及純化倍數越大則效果越好。但實際應用中往往須考慮多方面的因素來選擇和確定提純方法及步驟,如對提純樣品純度和活性的要求、原材料的來源、實驗條件以及所用材料的價格等都是我們要考慮的。
下面是從豬肝中提純異檬酸脫氫酶的過程。該提取過程有六個步驟,現將每一步驟所得樣品的比活性、得率和純化倍數等追蹤測定結果列于表1-2。據此結果可判斷每一步驟的提純效果。上海創賽科技提供9029-12-3,谷氨酸脫氫酶,Glutamate Dehydrogenase,>10 U/mg,BC ,商品編號:C84-0103-150U,價格1168.5元。
從表1-2可知豬肝異檸檬酸脫酶被提純570倍,得率是25.5%。
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