隨著新冠核酸檢測的日?;?,qPCR這一分子診斷領域的前沿技術也走進了大眾視野,這一技術相比原本的傳統PCR有著諸多技術優勢使其在疫情中脫穎而出成為全球范圍內核酸檢測的金標準。它到底有什么優勢使得它可以普遍推廣且保持優異的可靠性?
qPCR的優勢
1.風險低:全程只開蓋兩次,實驗室污染風險小
2.相比mNGS繁瑣的操作步驟,操作較為簡單,更加容易推廣
3. 速度快:擴增的DNA在qPCR反應進行的同時就被檢測出來,所以不需要像傳統PCR那樣在之后單獨檢測(如在瓊脂糖凝膠上)。
4. 效率高:qPCR被認為是一種高xiao率的方法,與液體處理自動化站配合,它可在短時間內處理大量的樣品。
5. 靈敏度高:qPCR能夠分辨出目標DNA分子數量的2倍差異,它可以檢測到低至只有幾個分子的初始DNA。與PCR相比,只要1/1000的量就可以了。
6. 量化范圍廣:可以在幾個數量級上進行廣泛的量化
7. 重現性:通常被認為是具有高度重現性的。
qPCR的應用
很多小伙伴可能只是通過核酸檢測,對qPCR產生了基礎的認識,但它的應用實際上可并不局限于用于核酸檢測。由于技術優勢明顯,qPCR的應用范圍很廣。由于qPCR已經存在了足夠長的時間,各項研究早已證明了它的可靠性和穩健性。同樣,qPCR循環器的制造商已開發了配套的平臺,液體處理自動化設備的供應商也開發了兼容qPCR的自動化解決方案。
常見的是qPCR在分子診斷中的應用,它正在慢慢取代傳統方法(顯微鏡圖像)。它被用來檢測、識別和量化導致疾病的微生物(細菌、病毒和真菌)。有了qPCR,人工勞動減少了。它可以實現在短時間內處理大量的樣品(每次運行多達384或者甚至1536個反應),是診斷實驗室中不可替代的方法。但必須指出的是,該方法只檢測微生物的DNA或RNA的存在,而不能檢測其生存能力。因此,有時仍然需要傳統的微生物學技術與之配合。此外qPCR另外一個非常重要的應用領域是基因表達研究,它可以幫助我們了解生物學、微生物學、醫學和其他生命科學的各個領域。