【基本原理】
Southern blot 是將電泳分離的DNA片段轉移到一定的固相支持物上的過程。DNA分子用限制性內切酶酶切后，經瓊脂糖凝膠電泳將所得的DNA片段按分子量大小分離，然后將含DNA 片段的瓊脂糖凝膠變性，將變性的單鏈DNA經虹吸作用轉移并固定于固相支持膜上。轉移過程中，膜上DNA片段的相對位置保持不變。用標記的DNA 或RNA探針與靶DNA雜交,洗去多余探針, 經放射性自顯影或顯色反應確定同源靶序列在膜上的位置和豐度。
【器材】
1.硝酸纖維素膜或尼龍膜
2.烤箱
3.封口機等其他實驗室常規儀器。
【試劑】
1.限制性核酸內切酶
2.變性液： 5mol/L NaOH 4ml (0.2mol/L)1mmol/L Tris-Cl(pH7. 6) 15ml (0.15mol/L)
3.中和液：lmol/L Tris-Cl(pH7.6) 10ml (0.1mol/L)
5mol/L NaCl 3ml
ddH2O 定容100ml
4.轉移液(20×SSC)：3mol /L NaCl 、0.3mol/L 檸檬酸鈉，pH7.0
5.平衡緩沖液： 1 mol/L Tris-Cl (pH9.5) 10ml (0.1mol/L)
5 mol/L NaCl 2ml (0.1mol/L )
1 mol/L MgCl2 5ml (50mmol/L )
6.預雜交液： 20×SSC 25 ml(5×)
10%SDS 0.2 ml(0.02%)
10%十二烷基肌酸鈉1 ml(0.1%)
鮭精DNA 1g (1×)
中和液20 ml
ddH2O 定容100ml
7.雜交液(臨用前配制)：
預雜交液50 ml
變性探針50μl
8.顯色液：
NBT 135μl
BCIP 105μl
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平衡緩沖液30 ml
9.抗地高辛標記酶聯抗體(抗體-Dig-Ap)
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