什么是引物（Primers）？
引物是聚合酶鏈反應（PCR）技術中使用的短單鏈DNA序列。在PCR方法中，使用一對引物與樣品DNA雜交并確定將被擴增的DNA區域。引物也被稱為寡核苷酸（Oligonucleotides）。
引物具備哪些特性？
引物的主要特性是需要與模板分子上的序列相對應（需要與模板鏈互補）。
引物有長短之分。短引物主要用于擴增小而簡單的DNA片段，而長引物用于擴增真核基因組DNA樣本。引物不宜過長（>30-mer primers）或過短。過短的引物會產生不準確的非特異性DNA擴增產物，過長的引物會導致雜交速率降低。平均而言，需要擴增的DNA片段大小應該在1-10KB以內。
引物結構要相對簡單，不含內部二級結構，避免內部折疊。同時，還需要避免“Primer-Primer”退火（Annealing），這種退火會產生引物二聚體（primer dimers）并破壞擴增過程。設計時，如果不確定要在引物的某個位置放置什么核苷酸（nucleotide），可以在該位置包括多個核苷酸，稱為混合位點（mixed site）。也可以使用基于核苷酸的分子插入物（肌苷，inosine）來代替常規核苷酸，以實現更廣泛的配對能力。
18-24個堿基的長度；
G/C含量在40-60%
起止于1-2G/C對；
熔化溫度（Tm）為50-60℃；
引物對之間的Tm應在5℃之內；
引物對不應該有互補區域。
Step 1 粘貼引物序列
點擊Primers→Add Primer...然后復制粘貼序列。
Step 2 選擇綁定位點（可選）
或者，可以從在序列上選擇所需的綁定站點開始。點擊鼠標并拖動以進行選擇，相應引物的熔化溫度就會顯示出來。在所選位置添加引物，Primers→Add Primer。
Step 3 選定底鏈或頂鏈（可選）
若引物是從選定的結合位點制成的，需要指定是選擇Top Strand還是Bottom Strand。
Step 4 引物命名
如有需要，可以為引物命名，方便后續管理。
Step 5 輸入描述
如有需要，可以輸入詳細描述。Description頁簽是默認打開的。
Step 6 修改引物
如需要，可以修改引物以增加一個5'擴展或引入突變。SnapGene提供兩種方法：
一種是在文本框中手動編輯引物序列；
另一種是在變更位置單擊引物序列，然后單擊Insertions選項卡。使用對話框控件添加所需的密碼子、限制位點、或肽編碼序列。
Step 7 查看結合部位和熔化溫度
結合位點的數目和計算的熔化溫度顯示在窗口的底部。點擊對話框右下角的藍色文本，可以看到熔化溫度計算方法的總結。
Step 8 查看引物
點擊Add Primer to Template可以查看新的引物。
Step 9 選擇多個引物
如要批量編輯多個引物，先選中目標引物。打開Edit Primers對話框，點擊Primers→Edit Primers。
Step 10 確認改動點
如上圖選擇想要修改的引物顏色、磷酸化、和字體、然后點擊OK。
Step 11 查看更新的引物
可以看到更新后的引物，如上面序列視圖舉例，引物的顏色被更改為紅色。
而在上面Map視圖中，可以看到更新顏色后的引物有圓點標記。
