你以為生化檢測僅僅是醫院做個小化驗那么簡單?too naive!!
生化檢測又稱臨床化學,是在研究人體健康和疾病的生物化學過程變化的基礎上,利用物理學、化學、生物學、病理學、免疫學、生物化學的理論與技術,通過檢測人體血液、尿液、腦脊液等樣本中化學物質的量與質的變化,為臨床醫生或研究者提供疾病診斷、病情監測、療效觀察、判斷預后以及健康評價等信息,最終判斷被檢者是否存在潛在疾病或排除某些疾病、揭示疾病變化以及藥物治療對機體生物化學過程影響的一門學科。
在臨床上,我們的醫學檢驗就經常要用到生化檢測,而在科研方面,生化檢測更是為物質含量測定、酶活力快速檢測、藥物研發等方面提供各種便捷。
一起來看看,生化檢測的發展歷程:
1904年,Folin用目視比色的方法測定肌酐
20世紀30年代,光電比色計法出現
20世紀50年代,分析技術如離心、層析、電泳、免疫分析、光譜分析、電化學發光等技術出現
20世紀70年代,放射免疫分析技術、化學發光技術和電化學發光技術快速發展
20世紀80年代,聚合酶鏈反應(PCR)將生物化學檢驗與分子生物學檢驗向前推進了一大步。
20世紀90年代,生物芯片技術飛速發展
21世紀,酶學分析技術建立,為生物化學的快速化、特異化奠定了基礎。
生化檢測的檢測原理:
生化試劑盒檢測的本質就是某物質化學變化的顯色反應,其反應過程可以劃分為四個區:延遲區、等速區、過渡區和平衡區,以時間為橫坐標、吸光度為縱坐標作圖,如下所示:
延遲區:無規律可尋。等速區:對應的是速率法,一般應用于酶類項目,可以使用因數法來計算待測濃度。
過渡區:對應的是固定時間法,目的是解決某些化學反應的非特異性問題,提高準確度。
平衡區:對應的是終點法,主要是測定某物質在樣本中的含量。
某物質與顯色劑反應后,形成區別于自身的顏色反應,在某一波長下,吸光度的強弱與物質的含量呈正比關系,其顯色反應的示意圖如下:
生化檢測試劑盒和ELISA檢測試劑盒對比
現在,很多公司都將測定特定指標所需要的試劑制成可直接使用或簡單配制即可使用的固體或液體,這就是——生化檢測試劑盒。
一般這種試劑盒會配備詳細的操作說明,為廣大實驗小白們省去查詢文獻資料、采購各種化學試劑、摸索試驗條件、優化實驗體系等所需要的時間和精力,同時,也大大節約了樣本量,獲得更可靠的實驗數據。
與實驗室常用的ELISA試劑盒對比發現,生化檢測試劑盒有著不可替代的作用,可以和ELISA試劑盒互為補充。
生化檢測試劑盒一般檢測領域:
氧化與抗氧系列、谷胱甘肽系列、氨基酸代謝系列、脂質代謝系列、氮代謝系列、輔酶I系列、輔酶II系列、神經遞質系列、維生素系列、糖代謝系列、離子系列、酯酶系列等
生化檢測試劑盒可以檢測的樣本類型的:
體液:血清(漿)、尿液、唾液等
組織:動植物組織
食品:果汁、蜂蜜、牛奶、紅酒、巧克力等
其它:保健品、化妝品
放一下學霸姐姐最近做的一個生化檢測實驗:
使用的是Elabscience家的總超氧化物歧化酶(SOD)比色法測試盒(WST-1法,貨號:E-BC-K020)
性能參數:
標曲曲線(僅供參考哈):
標準品稀釋:取SIGMA公司生產的SOD(貨號S7571-75KU)標準品用PBS(0.01 M,pH 7.4)稀釋不同的濃度,測定相應的OD值,按公式計算抑制率如下表:
實例分析(僅供參考哈):
按照操作過程,測定大鼠血清(稀釋20倍,加樣量為20 μL)、大鼠肝組織(10%組織勻漿的蛋白含量10.67 mg/mL,稀釋360倍,加樣量為20 μL)、西紅柿(20%組織勻漿的蛋白含量2.44 mg/mL,稀釋10倍,加樣量為20 μL)和HepG2細胞(蛋白含量3.18 mg/mL,稀釋30倍,加樣量為20 μL)中的SOD活力。
不得了了,學霸姐姐看發現這家的一個產品居然有11分的文獻引用!
Lee H Y, Back K. Melatonin induction and its role in high light stress tolerance in Arabidopsis thaliana [J]. Journal of pineal research, 2018.
這個J Pineal Res期刊,2018年IF=11.613,也是很牛了??!
學霸姐姐大致看了一下,這篇文章主要是講擬南芥中褪黑激素的誘導及其在高光脅迫下作用,文獻報道了植物為了防止ROS氧化損傷,進化出一系列的酶和非酶抗氧化防御系統,抗壞血酸過氧化物酶(APX)就是其中是一種酶。
所使用的產品是APX酶活檢測試劑盒(貨號:E-BC-K353)
嘖嘖,確實很不錯,有相關需求的朋友可以自行去翻閱,學霸姐姐只是一個搬運工哈。
好了,關于生化檢測,學霸姐姐只能幫你到這里了,剩下的,只能靠你自己了!