【基本原理】
一個混合蛋白質樣品經過聚丙烯酰胺凝膠電泳以后，各組分由于電泳遷移率不同而被分離。這種差異就蛋白質分子本身而言主要與分子量以及所帶凈電荷和形狀有關。當電泳體系中含有一定濃度的SDS時，電泳遷移率的大小僅取決于蛋白質的分子量(其它影響因素可忽略不計)，從而可直接由電泳遷移率推算出蛋白質的分子量。
SDS(十二烷基硫酸鈉)是一種陰離子去污劑，能夠與蛋白質結合，破壞蛋白質分子內部、分子之間以及與其它物質分子之間的非共價鍵, 使蛋白物變性而改變原有的空間構象。當有強還原劑(如巰基乙醇)存在使蛋白質分子內的二硫鍵被徹底還原，并且SDS 的總量為蛋白質量的3～10 倍、SDS 單位濃度大于1mol/L 時。這兩者的結合是定量的，大約每克蛋白質可結合1.4克SDS。蛋白質分子一經結合了一定量的SDS陰離子，所帶負電荷的量遠遠超過了它原有電荷量。從而消除了不同種類蛋白質間電荷的差異，且由于分子量越大的蛋白質結合的SDS越多、帶負電荷也越多,這就使各蛋白質-SDS復合物的電荷密度趨于一致;同時，不同蛋白質的SDS 復合物形狀也相似，均是長橢圓狀。因此，在電泳過程中，遷移率就取決于蛋白質-SDS 復合物的大小，也可以說是取決于蛋白質分子量的大小。
據經驗得知，當蛋白質的分子量在17 000-165 000之間時。蛋白質-SDS復合物的電泳遷移率與蛋白質分子量的對數呈線性關系：
lgMW=lgK-bm
式中MW 為蛋白質的分子量，m 為相對遷移率，K 為常數，b 為斜率。將已知分子量的標準蛋白質在SDS -聚丙烯酰胺凝膠中的電泳遷移率對分子量的對數作圖，即可得到一條標準曲線。只要測得未知分子量的蛋白質在相同條件下的電泳遷移率，就能根據標準曲線求得其分子量。
【器材】
1.電泳儀
2.垂直板電泳槽
3.微量進樣器
4.乳頭吸管
5.50ml小燒杯
【試劑】
1.貯備液的配制
(1)30%丙烯酰胺溶液：丙烯酰胺29.2g，甲叉雙丙烯酰胺0.8g，加水至100ml，棕色瓶4℃保存。
(2)1.5mmol/LTris-Cl分離膠緩沖液，pH8.8(4×)：稱取18.15g Tris，用1NHCl調pH至8.8，加水至100ml，4℃保存。
(3)1.0mmol/L Tris-Cl濃縮膠緩沖液，pH6.8(4×)：稱取5.98g Tris，用1NHCl調pH至6.8，加水至100ml，4℃保存。
(4)電極緩沖液(pH8.3)：取14.40g甘氨酸，3.00g Tris，加10ml 10%SDS，加水至1L，4℃保存。
(5)10% SDS：取10g SDS，加水至100ml ，完全溶解后室溫保存。
(6)10%過硫酸銨溶液(AP)：臨用前現配，或配好后-20℃分裝凍存。
(7)染色液(0.25%考馬斯亮藍R-250、50%甲醇、7%乙酸)：考馬斯亮藍R-250 2.5g，甲醇500ml、70ml 冰乙酸，加水至總體積1000ml(甲醇可用無水乙醇代替)。
(8)脫色液(30%甲醇、7%乙酸)：甲醇300ml，冰乙酸70ml，加水至1000ml(也可用無水乙醇代替甲醇)。
(9)樣品緩沖液(2×)：H2O 2.4ml，濃縮膠緩沖液1.0ml、甘油0.8ml、10% SDS
3.2ml，2-硫基乙醇0.4ml。0.025%(W/V)溴酚蘭0.2ml。
(10)TEMED
2.工作液的配制
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