一、目的
用于化妝品微生物指標（菌落總數、霉菌和酵母總數、耐熱大腸菌群、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌）檢測；
二、參照標準及微生物限量
本方案參照食品藥品監督管理總局批準頒布的《化妝品安全技術規范》2015版和2022版征求意見稿、SN/T 2098-2008 《食品和化妝品中的菌落計數檢測方法-螺旋平板法》。
三、組成部分
本方案提供化妝品微生物指標檢測所需儀器和培養基及其他試劑。
四、檢測流程及方案
流程解讀
1.樣品采集
2.樣品前處理
2.1液體樣品：用吸管手動吸取或用自動重量稀釋儀自動稱重稀釋，均質器自動均質后制成1:10檢樣。按需進行梯度稀釋。
2.2 油性液體樣品：10g樣品+5mL滅菌石蠟油混勻+10ML滅菌吐溫80
?。?0℃-44℃水浴振蕩10min）+75ML滅菌生理鹽水（40℃-44℃預溫），乳化后制成1:10的懸液。按需進行梯度稀釋。
2.3 膏、霜、乳劑半固體狀樣品
2.3.1 親水性樣品：10g樣品+ 90ML滅菌生理鹽水，均質1min—2min，靜止取上清，上清為1:10勻液。按需進行梯度稀釋。
2.3.2 疏水性樣品：10g樣品+10mL 滅菌液體石蠟+10mL 滅菌吐溫 80+70mL 滅菌生理鹽水，均質3min—5min，制成1：10 檢液。按需進行梯度稀釋。
2.3.3 固體樣品：稱取10g+90mL 滅菌生理鹽水，均質3min—5min，充分均質混勻，靜置后，取上清液作為1：10 的檢液。
總結：化妝品根據與水分子的親和性及性狀的不同，具有不同的類型，包括疏水性樣品和親水性樣品以及液體樣本和固體樣本，相關標準規定不同類型的樣品取10g/10mL經過不同的前處理，形成1:10的檢液。其中，親水性樣本一般選擇生理鹽水進行稀釋，而油性液體樣本或疏水性樣本稀釋液除生理鹽水以外，還需添加一定體積的非離子型表面活性劑（如tuwen80）與液體石蠟混合用于樣品的乳化過程，從而使微生物更均勻的分散，以便于其檢出。此過程一般可通過重量稀釋儀和均質器實現。
3. 樣品接種
根據化妝品技術規范需要傾注法接種樣品，但此法對操作人員的要求較高，而涂布法操作難度低，可預先倒置相關微生物檢測的培養基平板，用自動細菌涂布儀涂布接種，上樣量可調至100微升。此外，根據SN/T 2098-2008 《食品和化妝品中的菌落計數檢測方法-螺旋平板法》，化妝品中菌落計數還可選擇螺旋接種法。
4.樣品培養
細菌用恒溫培養箱培養，霉菌和酵母菌用霉菌培養箱，培養條件根據微生物種類的不同而不同。
表2 不同微生物指標檢測培養條件
微生物種類 檢測指標 | 培養條件 | |
溫度 | 時間 | |
菌落總數 | 36℃±1℃ | 48h±2h |
耐熱大腸菌群 | 44.5℃±0.5℃/36℃±1℃ | 24h±2h/18h-24h |
銅綠假單胞菌 | 36℃±1℃ | 18h—24h |
金黃色葡萄球菌 | 36℃±1℃ | 24h±2h |
霉菌和酵母菌 | 28℃±2℃ | 5d |
5.樣品檢測
微生物定量檢測用全自動菌落計數儀實現菌落計數，如樣品中菌落總數的測定、霉菌及酵母菌總數；微生物定性檢測用自動微生物生化鑒定系統實現，如銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌的定性。
五．產品信息
表3 化妝品微生物指標檢測相關設備列表
序號 | 設備名稱 | 推薦型號 | 推薦品牌 |
1 | 重量稀釋儀 | DW-JURAY | 杭州大微 |
2 | 拍擊式均質器 | DW-4 | 杭州大微 |
3 | 微生物試劑自動分裝儀 | DW-9 | 杭州大微 |
4 | 全自動微生物螺旋接種儀 | DW-L2000 | 杭州大微 |
5 | 自動微生物涂布接種儀 | DW-16 | 杭州大微 |
6 | 全自動革蘭氏染色儀 | DW-GS100 | 杭州大微 |
7 | 細菌麥氏濁度儀 | DW-MF30 | 杭州大微 |
8 | 自動微生物生化鑒定系統 | DW-M80 | 杭州大微 |
9 | 全自動微生物菌落計數儀 | DW-V9 | 杭州大微 |
10 | 恒溫培養箱 | BPMJ-150F | 上海力康 |
11 | 霉菌培養箱 | BPH-9162 | 上海力康 |
12 | 水浴振蕩器 | HTS-10 | 上海赫田 |
表4 化妝品微生物指標檢測相關培養基
序號 | 檢測指標 | 培養基名稱 | 規格及貨號 | 推薦品牌 |
1 | 細菌總數 | TTC卵磷脂、吐溫 80 —營養瓊脂 | 250g/瓶, HB5189 | 青島海博 |
2 | 耐熱大腸菌群 | 雙倍乳糖膽鹽（含中和劑） | 250g/瓶， HB8593 | 青島海博 |
3 | 伊紅美蘭（EMB）瓊脂 | 250g/瓶， HB0107 | 青島海博 | |
4 | 胰蛋白胨水 | 250g/瓶， HB5218 | 青島海博 | |
5 | 銅綠假單胞菌 | SCDLP 液體培養基 | 250g/瓶 | 廣東環凱 |
6 | 十六烷基三甲基溴化銨培養基 | 9cm*10/包， HBPM5184 | 青島海博 | |
7 | 營養瓊脂 | 250g/瓶， HB0109 | 青島海博 | |
8 | 金黃色葡萄球菌 | SCDLP 液體培養基（見上）或 7.5%氯化鈉肉湯 | 250g/瓶， HB4119 | 青島海博 |
9 | Baird Parker 平板 | 250g/瓶， HB4115 | 青島海博 | |
10 | 亞碲酸鹽卵黃增菌液（Baird Parker 平板添加劑） | 5ml*10 ，HB4116-1 | 青島海博 | |
11 | 霉菌及酵母 | 孟加拉紅瓊脂培養基 | 250g/瓶，HB0237-2 | 青島海博 |
表5 化妝品微生物指標檢測相關試劑
序號 | 試劑名稱 | 用途 | 規格及貨號 | 推薦品牌 |
1 | 氯化鈉 | 樣品前處理稀釋 | 500g/瓶 | 國藥 |
2 | 吐溫80 | 樣品乳化劑 | 100ml/瓶，9005-65-6 | biosharp |
3 | 無菌液體石蠟 | 樣品前處理 | 1.7ml*20， GS070 | 青島海博 |
4 | Kovacs氏靛基質試劑盒 | 耐熱大腸靛基質實驗 | 5ml*2/盒；HB8279 | 青島海博 |
5 | 革蘭氏染色液 | 細菌染色 | 500Ml/瓶，3瓶/套 | 杭州大微 |
