分光光度計,又稱光譜儀(spectrometer),是將成分復雜的光,分解為光譜線的科學儀器。測量范圍般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區和波長范圍為200~380 nm的紫外光區。不同的光源都有其有的發射光譜,因此可采用不同的發光體作為儀器的光源。鎢燈的發射光譜:鎢燈光源所發出的380~780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后,可得到由紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫組成的連續色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源
光度定義
分光光度法是在定波長處或定波長范圍內光的吸收度,對該物質行定性或定量分析。常用的波長范圍為:(1)200~380nm的紫外光區,(2)380~780nm的可見光區,(3)2.5~25μm(按波數計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的密度和準確度,所有儀器應按照家計量檢定規程或本附錄規定,定期行校正檢定
儀器組成
分光光度計已經成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統組成。
原理
分光光度計采用個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生定波長的光源,光線透過測試的樣品后,分光線被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過被測物質溶液時,被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關系如下式:
A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸光度;
I。為入射的單色光強度;
I 為透射的單色光強度;
T 為物質的透射率;
k 為摩爾吸收系數;
L 為被分析物質的光程,即比色皿的邊長;
儀器點
的雙光路、雙光束光學系統,儀器分辨率更,雜散光更低,穩定性、可靠性更強,分析更加準確
采用320*240位點陣式亮6 "液晶顯示器,顯示清晰,信息備
的長光程光路設計,使儀器分辨率更,尤其適合微量測試 強大的數據處理能,使測試結果能得到充分的應用,用戶編輯更為簡單快捷
采用懸架式光學系統設計,整體光路立固定在16mm厚的鋁制無變形基座上,底板的變形和外界的震動對光學系統不產生何影響,從而大大提了儀器的穩定性和可靠性
采用同步正弦機構,波長準確度,重復性好
采用ARM系統
0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0六檔光譜帶寬自動可選,滿足不同用戶的測量需求
24位速、度A/D轉換,儀器度更、反應速度更快
主要元件采用口配置,使儀器雜散光更低、穩定性、可靠性更強
能更加強大,主機可立成光度測量、定量測量、光譜掃描、動力學、DNA/蛋白質測試,多波長測試及數據打印等能
操作方法
1.接通電源,打開儀器開關,掀開樣品室暗箱蓋,預熱10分鐘。
2.將靈敏度開關調至"1"檔(若零點調節器調不到"0"時,需選用較檔。)
3.根據所需波長轉動波長選擇鈕。
4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處,用擦鏡紙擦清外壁,放入樣品室內,使空白管對準光路。
5.在暗箱蓋開啟狀態下調節零點調節器,使讀數盤針向t=0處。
6.蓋上暗箱蓋,調節"100"調節器,使空白管的t=100,針穩定后逐步拉出樣品滑竿,分別讀出測定管的光密度值,并記錄。
7.比色畢,關上電源,取出比色皿洗凈,樣品室用軟布或軟紙擦凈。
注意事項
1.該儀器應放在干燥的房間內,使用時放置在堅固平穩的作臺上,室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風,防止燈泡燈絲發亮不穩定。
2.使用本儀器前,使用者應該了解本儀器的結構和作原理,以及各個操縱旋鈕之能。在未按通電源之前,應該對儀器的安性能行檢查,電源接線應牢固,通電也要良好,各個調節旋鈕的起始位置應該正確,然后再按通電源開關。
3.在儀器尚未接通電源時,電表針須于"0"刻線上,若不是這種情況,則可以用電表上的校正螺絲行調節。
日常維護
分析儀器作者要懂得儀器的日常維護和對主要術標的簡易測試方法,自己經常對儀器行維護和測試,以保證儀器作在佳狀態。
、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。他們可以引起機械件的銹蝕,使金屬鏡面的光潔度下降,引起儀器機械分的誤差或性能下降;成光學件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕,產生光能不足、雜散光、噪聲等,甚至儀器停止作,從而影響儀器壽命。維護保養時應定期加以校正。應具備四季恒濕的儀器室,配置恒溫設備,別是地處南方地區的實驗室。
二、環境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可以影響機械系統的靈活性、降低各種限位開關、按鍵、光電偶合器的可靠性,也是成須學件鋁膜銹蝕的原因之。因此須定期清潔,保障環境和儀器室內衛生條件,防塵。
三、儀器使用定周期后,內會積累定量的塵埃,好由維修程師或在程師導下定期開啟儀器外罩對內行除塵作,同時將各發熱元件的散熱器重新緊固,對光學盒的密封窗口行清潔,要時對光路行校準,對機械分行清潔和要的潤滑,后,恢復原狀,再行些要的檢測、調校與記錄。
折疊編輯本段維護保養
分光光度計作為種密儀器,在運行作過程中由于作環境,操作方法等種種原因,其術狀況然會發生某些變化,可能影響設備的性能,甚至誘發設備故障及事故。因此,分析作者須了解分光光度計的基本原理和使用說明,并能及時發現和排除這些隱患,對已產生的故障及時維修才能保證儀器設備的正常運行。
1)若大幅度改變測試波長,需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正"0"和""點。然后再測量。
2)針式儀器在未接通電源時,電表的針須位于零刻度上。若不是這種情況,需行機械調零。
3)比色皿使用畢后,請立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。
4)操作人員不應輕易動燈泡及反光鏡燈,以免影響光效率。
5)1900型等分光光度計,由于其光電接收裝置為光電倍增管,它本身的點是放大倍數大,因而可以用于檢測微弱光電信號,而不能用來檢測強光。否則容易產生信號漂移,靈敏度下降。針對其上述點,在維修、使用此類儀器時應注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下,因此在預熱時,應打開比色皿蓋或使用擋光桿,避免長時間照射使其性能漂移而導致作不穩。
6)放大器靈敏度換擋后,須重新調零
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