植物葉片(綠色部位)光合速率的測定
實驗準備:
儀器:氧電極系統一套;30ml針筒,剪刀,雙面刀(或單面刀),1ml移液器,鑷子,吸管,吸水紙,打孔器。
試劑:(1)測定介質50mmol/L pH7.5的Tris-HCl緩沖溶液,內含50mmol/L的HCO3-。稱取6.05克Tris(三羥甲基氨基甲烷)、2.1克NaHCO3溶于800~900ml水中,滴加1mol/L HCl,調pH7.5,加水1000ml。除此之外,測定介質還可用磷酸、Hepes、Tricine等pH7.5 50mmol/L的緩沖液。僅用pH7.5的50mmol/L NaHCO3的水溶液也可作測定介質。
(2)0.5mol/L KCl:稱取1.86克KCl溶于50ml蒸餾水中(配好后可長時間使用)。實驗步驟:
1準備好所需的儀器和試劑,安裝好氧電極,并與計算機連接,校正(詳細操作步驟見廠家提供的說明書或漢語說明書)。
2材料準備:取光適應好的小麥、水稻等植物葉片(組織),用打孔器取一定面積(稱取一定重量)(按每ml反應體積需0.5cm2葉碎片取樣),將葉塊放入盛有測定介質的小燒杯中,然后將小燒杯放到真空器中進行抽氣,排出葉片(組織)細胞間隙內的氣體,使葉片沉到底部?;蛘邔⑷~碎塊倒入30ml注射器中,進行手工真空滲入,排除葉內氣體,使葉塊下沉。然后將下沉的葉塊取出,用剪刀剪成面積約為2mm2的碎片,放入氧電極反應杯中。
3光合速率的測定:準確加入50mmol/L NaHCO3溶液1~1.5ml。打開光源,給反應杯照光。因“光合滯后期”緣故,葉片在照光初期仍處于耗氧狀態,需過1~3分鐘后才由耗氧轉為放氧,所以應在照光下適應一段時間后,再進行光合速率的測定。
4反應結束后,將反應杯清洗,重復步驟3,所有實驗結束后,存儲數據。按說明書操作,清洗反應杯,清潔電極,保持電極的干燥。(注意事項見說明書)
5光合速率的計算:從記錄曲線得到單位時間氧的變化量,根據葉片面積和反應介質的體積計算出樣品的光合速率。
完成該實驗可以選用的氧電極型號有:Leaflab2(只能用于測定葉片)、Chlorolab2、Chlorolab3。