氧電極測定小麥胚呼吸活性
實驗準備:
儀器器具:Oxytherm氧電極系統一套;剪刀,雙面刀(或單面切刀或者手術刀),1ml移液器,鑷子,吸管,吸水紙,燒杯3個
試劑:測定介質50mmol/L pH7.5的Tris-HCl緩沖溶液。稱取6.05克Tris(三羥甲基氨基甲烷) 800~900ml水中,滴加1mol/L HCl,調pH7.5,加水1000ml。除此之外,測定介質還可用磷酸、Hepes、Tricine等pH7.5 50mmol/L的緩沖液。
實驗步驟:
1準備好所需的儀器和試劑,安裝好氧電極,并與計算機連接,校正(詳細操作步驟見廠家提供的說明書或漢語說明書),校正結束后加入2mL緩沖液,開啟轉子,走基線(看基線是否穩定,測定前必須保證基線穩定)。
2均勻選取十個小麥種子,用手術刀切下胚
3將反應杯中的緩沖液吸出,重新加入2mL緩沖液,將切下的胚放入反應杯中,測定曲線如下:
4測定十分鐘后,呼吸速率穩定下降,用軟件計算曲線的斜率(呼吸速率)。假設曲線斜率為A。
5測定結束后,將樣品吸出,清洗反應杯,重新加入小麥胚,重復步驟3
6小麥種子胚呼吸速率的計算:
呼吸速率Sr(umol O2/Per*s)=曲線斜率A(umol O2/ml*s)*2ml = A/300(umol O2/Per*s)
注:假設曲線斜率為A;Per表示每個胚
注意事項:
1首先參考氧電極使用注意事項
2測定胚活性時只需要切下胚,不需要測定整個種子,種子中只有胚有活性
3選取小麥種子要均一飽滿,每次測定數量一致
可以完成該實驗的儀器有:Oxygraph; Oxytherm; Chlorolab-2