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        1. 教育裝備采購網
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          上海古朵:改良油紅O染色液操作步驟

          教育裝備采購網 2017-07-11 09:10 圍觀488次

            脂質(Lipid)是中性脂肪、類脂及其衍生物的總稱,其共同的物理特性是不溶于水,易溶于有機溶劑(如乙醇、等)。人體的脂肪主要有兩種:1、儲存脂肪,如中性脂肪,主要分布于皮下、腎、胰腺等部位。2、結構脂肪,如類脂(磷脂、糖脂、膽固醇等),主要分布于細胞內。中性脂肪(Neutral fat)是由三分子脂肪酸和一分子甘油組成的脂類,呈中性。中性脂肪是儲存能量的方式之一,在氧化時釋放出能量。中性脂肪染色經常采用蘇丹Ⅱ、蘇丹Ⅲ、蘇丹Ⅳ、蘇丹、油紅O法等。傳統方法采用蘇丹染料,最近發現偶氮染料油紅O更適合脂肪的染色。油紅O是很強的脂溶劑和染脂劑,較易與甘油三脂結合呈小脂滴狀,

            與磷脂結合力稍差。其染色原理一般認為是物理上的溶液作用或吸附作用,借溶液作用使脂肪染色。染料在冰凍切片內脂質的溶解度較原溶劑中的溶解度更大,所以在染色時染料就從有機溶劑轉移入脂質而使脂肪染色。

            改良油紅O染色液主要用于顯示組織器官的脂肪變性和類脂質的異常沉著,常發生于肝、腎、心等實質臟器的脂肪變性,細胞內出現多數中性脂肪滴;鑒別和診斷脂肪組織中所發生的腫瘤及其性質。標本不采用含有乙醇的固定液(如需要固定可采用10%福爾馬林),樣本不采用石蠟切片,需用冰凍切片或碳蠟切片,脂肪的陽性染色結果呈橘黃至紅色,但具體顏色因脂質濃度而定。

            產品組成

            產品

            規格

            2×50ml

            2×100ml

            儲存

            試劑(A):改良

            Oil Red O Stain

            A1: Oil Red O Stain A

            30ml

            60ml

            4℃,避光

            A2: Oil Red O Stain B

            20ml

            40ml

            4℃

            充分搖勻A1、A2后,按A1、A2=3:2比例混合靜置10min, 即為改良Oil Red O Stain,不宜提前配制;如有條件盡量進行過濾,以免色素沉淀,造成假陽性。

            試劑(B): Mayer 蘇木素染色液

            50ml

            100ml

            4℃,避光

            使用說明書

            1份

            自備材料:

            1、60%異丙醇

            2、蒸餾水

            3、1%鹽酸溶液

            甘油明膠或阿拉伯糖膠

            操作步驟(僅供參考)

            1、冰凍切片厚度6~10μm,不固定或10%福爾馬林固定10min后水洗。

            2、入蒸餾水中稍沖洗。

            3、 入60%異丙醇浸洗20~30s。

            4、 入改良油紅O染色液(加蓋),密閉染色10~15min。

            5、 分色: 入60%異丙醇稍洗以便去除染液。

            6、 入蒸餾水稍微清洗。

            7、 入 Mayer 蘇木素染色液,復染核1~2min。

            8、 (可選)1%鹽酸溶液稍微分化一下。

            9、 (可選)自來水漂洗10min或稀碳酸鋰溶液促藍。

            10、 入蒸餾水稍微清洗。

            11、 用濾紙吸干周圍水分。甘油明膠或阿拉伯糖膠封固。

            染色結果:

            中性脂肪

            橙紅色或者橘紅色

            細胞核

            藍色

            注意事項

            1、改良油紅O染色液不夠穩定,易產生沉淀,不宜提前配制。

            2、如果60%的異丙醇不易獲得,亦可采用70%的乙醇。

            3、由于脂肪易溶于有機溶劑,所以顯示脂肪一般不能像石蠟切片一樣處理,而通過冰凍切片染色來顯示。

            4、作脂肪染色的冰凍切片不可太薄,過薄的切片常會使脂質丟失。

            5、Mayer蘇木素染色液復染時間不能過長。

            6、染色結果不能長期保存,應盡快觀察及照相。

            7、甘油明膠封固的樣本,保存時間不長。如需長期保存,可以在蓋玻片與載玻片交界的邊緣用中性樹膠封閉。

            有效期:12個月有效。

          來源:教育裝備采購網 作者:上海古朵 責任編輯:李瑤瑤 我要投稿
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