【基本原理】
從全血中制備白細胞DNA,可用水直接破裂血中紅細胞和白細胞的細胞膜及核膜,釋出血紅蛋白、細胞核;再用KI 裂解細胞核并溶解DNA;最后用酚/氯仿除去蛋白質,加無水乙醇使DNA沉淀,經A260/A280檢測DNA含量,再經瓊脂糖電泳鑒定。
【器材】
1.離心機
2.紫外分光光度計
【試劑】
1.5mmol/L KI:8.3g KI加H2O到10ml
2.0.9% NaCl
3. 氯仿/異戊醇(24:1)
【操作步驟】
1.取200μl抗凝血,加入1ml 水。
2.8000rpm離心5min,棄上清。
3.沉淀中加入40μl 5mol /L KI,旋渦振蕩30Sec。
4.加入200μl 0.9% NaCl,然后再加入300μl氯仿/異戊醇,振蕩30Sec。
5.10 000rpm離心5min。
6.小心吸取上清液,加入冷無水乙醇1ml。
7.10 000rpm離心5min,棄無水乙醇。
8.DNA 樣品自然干燥。
9.加適量的H2O或TE溶解DNA。
10.核酸定量測定和電泳鑒定。
上海創賽科技性能卓越,白介素細胞因子,胎牛血清,電泳設備科學儀器,原料藥標準品,化學試劑,細胞培養耗材,上海創賽,海量產品特價促銷中,歡迎來電咨詢!