梯度離心是待分離的物質在具有密度梯度的介質中進行的離心。梯度離心可分為兩種,即密度梯度離心(又稱沉降速度離心、速度區帶離心或差速區帶離心)和平衡密度梯度離心(等密度梯度離心和沉降平衡離心)
1.密度梯度離心
密度梯度離心(Density gradient centrifugation)是在密度梯度介質中進行的一種沉降速度離心。常用有機物如蔗糖或甘油來制作梯度。梯度的作用是使離心液穩定以減少擴散或得到較為鋒利的區帶。被離心的物質根據其沉降系數不同進行分離,同類物質則因分子大的沉降速度快于分子小的物質(見公式5)從而得到分離(圖5-1)。
密度梯度離心和差速離心一樣是依賴時間的,離心時間過長已經分離的物質均可沉到管底或某一介質密度區域(圖5-2)。
2.平衡密度梯度離心
平衡密度梯度離心(Equilibrium Density Gradient Centrifugation)雖然也是在密度梯度介質中進行的離心,但被分離的物質是依靠它們的密度不同進行分離的,此種離心常用無機鹽類(如氯化銫CsCl)制作密度梯度。在梯度介質中,當被分離的物質分別達到與其密度相同的介質部位時就不再移動,從而達到分離的目的(圖5-3)。例如,DNA在平衡密度梯度離心過程中,停留在密度梯度為1.7g/cm的位置,而RNA停止在1.9g/cm 的部位。由此可見平衡密度梯度離心是不依賴于時間的,只要梯度不破壞,時間延長不影響分離(圖5-3)
常用詞匯
離心Centrifugation
離心機Centrifuge
超速離心機Ultracentrifuge
差速離心Differential Centrifugation
沉降系數Sedimentation Coefficient
密度梯度離心Density Gradient Centrifugation
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