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          CytoSense流式細胞儀應用于高濁度水體的對策

          教育裝備采購網 2007-12-24 12:58 圍觀1539次

          快訊:浮游植物流式細胞儀CytoSense應用于高濁度水體的對策

              荷蘭CytoBuoy公司的CytoSense、CytoBuoy和CytoSub等浮游植物流式細胞儀在國際海洋與淡水研究和監測領域得到了廣泛應用。針對我國很多水體濁度高、泥沙含量高的特點,根據國內用戶需求,澤泉科技有限公司與國際上最著名的浮游植物流式細胞儀制造商荷蘭CytoBuoy公司合作提出如下解決方案:

          1)進樣篩選
              水樣被進樣器采集后,在進樣器內部經過篩選排除空氣和砂粒(圖1)。進樣器內部設計非常獨特,從上到下有三個出水口,其中上邊的出水口用于排除空氣,多數砂粒由于沉降速率較大會經下部出水口排除,只有中間的出水口用于采集浮游植物、浮游動物和與它們密度相差不大的砂粒進行流式細胞計數和其它分析。
              如果水中砂粒粒徑很大,可以在進樣器中增加一個不銹鋼篩網,用于濾除粒徑大于1 mm的泥沙顆粒。
              對于多數粒徑大于50-100 um的砂粒而言,它們的沉降速率大于CytoSense的進樣流速(1-2 cm/s),因此不會被進樣器吸入。



          2)外置鞘液系統
              CytoBuoy系列浮游植物流式細胞儀(包括CytoSense、CytoBuoy和CytoSub)的一個重大創新就是不用外加鞘液,而是直接采用水樣的過濾液作為鞘液,這樣既節省了用戶的成本,也省去了更換鞘液的麻煩,同時還避免了流路發生生物污染的可能。但是由于樣品過濾生成的鞘液量不是很大,在測量高濁度水體樣品時,就難于避免水體中黃色物質發出的熒光的影響。另外,對于類似我國黃河水體、或者洪水期的長江水體而言,泥沙顆粒非常多,可能每100個顆粒中只有1-5個浮游植物細胞(甚至有可能每1000個顆粒中只有1個浮游植物細胞),其它都是泥沙顆粒,這極大增加了浮游植物計數的難度。但即使是這樣的水樣,CytoSense也是可以測量的。為了達到更好的分析效果,建議采用如下的外置鞘液系統。
              外置鞘液系統的鞘液采用蒸餾水或市場上購買的桶裝水皆可。自來水由于含氯,對浮游植物活性有影響,因此不建議使用。其它類似PBS緩沖液等也可作為鞘液,只是比蒸餾水或桶裝水的獲取更麻煩,成本更高。鞘液桶采用容量20-30升的塑料桶即可。根據工作模式,可分為外置非循環鞘液系統外置循環鞘液系統。
              外置非循環鞘液系統(圖2):鞘液一次性使用,用完即排出不在使用。連續工作1小時約需5升鞘液,工作1天約需50升鞘液。


              外置循環鞘液系統(圖3):鞘液使用后經循環過濾系統可重復利用,大大節省了鞘液用量。由于循環使用鞘液,水體樣品中的黃色物質會流入鞘液中,盡管被稀釋,但還是會產生微弱的熒光。因此建議鞘液桶足夠多(20-30升),以盡量降低黃色物質熒光引起的誤差。同時建議每天更換新的鞘液。



              通過以上這些設計,CytoSense完全可以直接測量高濁度水體樣品(如洪水期的長江水樣、長江口水樣),可以對水中總顆粒進行計數。通過樣品是否發出熒光,可以區分浮游植物和其它顆粒。通過多色熒光,可以對浮游植物進行聚類分析。通過浮游植物專家庫,可以對多數非球狀西部鑒定到種。當然,如果結合GV模塊(自動破碎微囊藻的囊),還可以對微囊藻(不需預處理)直接測量。

          附錄:
              荷蘭CytoBuoy公司是一家受歐盟資助、專業生產浮游植物流式細胞儀的公司。
              傳統的流式細胞儀只能分析較小的細胞(< 15 mm),不適合分析體積較大的浮游生物細胞。從1986年開始,該公司就受荷蘭和歐盟資助,設計生產專為浮游生物分析設計的流式細胞儀——光學浮游生物分析儀(Optical Plankton Analyser,OPA)。
              1996年,該公司提出了設計野外在線監測型流式細胞儀的理念,并連續10年獲得歐盟資助。在此基礎上,該公司設計生產了全球第一臺便攜式浮游植物分析流式細胞儀——CytoSense,全球第一臺在線監測型流式細胞儀——CytoBuoy,以及全球第一臺水下流式細胞儀——CytoSub。其中CytoSense的特殊版本CytoSense GV型,可以直接分析帶氣囊的微藻樣品(如微囊藻、棕囊藻等),省去了破碎氣囊的復雜步驟。
              根據需要,CytoSense可升級為CytoBuoy或CytoSub。CytoBuoy可以無線傳輸數據,傳輸距離達16 Km。CytoSub可以在水下200 m處正常工作。
              新增“指紋”功能可以建立浮游植物數據庫,利用流式細胞儀進行浮游植物分類。
              新增成像功能可以對感興趣的細胞進行拍照,獲取浮游植物細胞圖片。

           

          上海澤泉科技有限公司

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