摘要：本發明提供了一種布氏桿菌EF-Tu蛋白單克隆抗體MAb及其制備方法與應用，通過將EF-Tu基因克隆到pET30a載體中構建出原核表達載體中表達攜帶His標簽的EF-Tu蛋白，并用純化的EF-Tu蛋白免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾細胞與骨髓瘤SP2/0細胞融合制備雜交瘤細胞，通過特異性篩選、體外培養、純化而獲得抗馬耳他型布氏桿菌EF-Tu?MAb。本發明在篩選時采用原核表達攜帶GST標簽的EF-Tu純化可溶蛋白來包被ELISA板，這樣不僅可以避免篩選到識別His標簽蛋白的MAb，而且可溶的GST-EF-Tu蛋白活性更接近天然的布氏桿菌延伸因子Tu蛋白，保證了雜交瘤細胞的特異性。Westem?blot結果表明獲得的MAb能夠與攜帶GST或His標簽的布氏桿菌EF-Tu蛋白抗原反應，而不與GST標簽或大腸桿菌菌體蛋白反應，抗體MAb具有強特異性。
- 專利類型發明專利
- 申請人山東農業大學;
- 發明人王方昆;趙孝民;李宏梅;劉思當;趙寧寧;
- 地址271018 山東省泰安市岱宗大街61號
- 申請號CN201510731321.3
- 申請時間2015年10月30日
- 申請公布號CN105218668A
- 申請公布時間2016年01月06日
- 分類號C07K16/12(2006.01)I;A61K39/395(2006.01)I;A61P31/04(2006.01)I;G01N33/577(2006.01)I;
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