基于 SPRI(Solid Phase Reversible Immobilization ) 技術,在磁珠法反應體系中,核酸分子(DNA & RNA)會由線性壓縮成球狀, DNA 在一定濃度的 PEG 存在條件下,NaCl 或 MgCl2 促進條件下,DNA 分子構象會發生急劇變化,會暴露出磷酸骨架上大量的帶負電荷的磷酸基團,與表面帶負電荷的羧基-COOH 磁珠結合。目前認為這種負負電荷間的作用是由于帶正電荷的鹽離子的作用(如 Na+)。帶負電磷酸基團借由解離的鹽離子(如 Na+)與羧基形成「陰離子-陽離子-陰離子」的鹽橋結構,使 DNA 被特異性吸附到羧基磁珠表面。而當反應緩沖液被棄除后,加入水性分子,會快速充分水化核酸分子,解除三者之間的離子相互作用,使吸附到磁珠上的核酸分子被純化出來。利用磁珠的磁性,可通過外加磁場進行收集。
受益于高通量測序技術的發展,磁珠也憑借其高通量,適用于自動化的特點備受推崇,廣泛用于 NGS 文庫構建中的 DNA 提取純化及雙輪分選(片篩)。
DNA 提取純化的目的在于去除不想要的片段、回收需要的片段。由于磁珠優先吸附大片段,因而可通過一定比例的磁珠吸附特定大小以上的片段,丟棄上清(去除非目標片段)后將磁珠吸附的 DNA 洗脫回收。
DNA 雙輪分選(片篩)目的在于從片段中選擇特定區域的 DNA 片段大小。由于磁珠優先吸附大片段,因而需通過兩輪磁珠操作進行分選。
兔牙生物科技研發的 BunnyMagTM 磁珠分選純化試劑盒中的磁珠,與市面上大部分的磁珠類似,
磁珠結構(分為 3 層):
? 內層的核心是 Polystyrene,PS
? 第二層包裹磁性物質——四氧化三鐵(Fe3O4)
? 外層表面是羧基(-COOH)修飾的高分子材料
磁珠體系主要包括磁珠、聚乙二醇(PEG)、鹽離子(NaCl)
兔牙科技 BunnyMagTM 磁珠的優勢:
?。?)樣本需求量低:微量的材料即可提到高濃度的核酸;
?。?)操作簡單快速:整個操作流程基本分為五步(裂解、結合、洗滌、干燥、洗脫),全程無需離心操作,大多可在 30~60 分鐘內完成;
?。?)質量穩定可靠:游離的磁珠與核酸的結合量更大,特異性的結合使得核酸純度更高,且可通過控制磁珠表面基團來調節核酸回收量;
?。?)全自動化操作:采用核酸提取儀可實現自動化、高通量操作,可實現幾十甚至幾百個樣品的提??;
?。?)安全無毒無害:試劑不含酚等有毒化學試劑,完全符合現代化環保理念。