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        1. 教育裝備采購網
          第八屆圖書館論壇 校體購2

          土壤脲酶(Solid-Urease,S-UE)測定

          教育裝備采購網 2020-05-11 10:40 圍觀1838次

            正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

            測定意義:

            S-UE能夠水解尿素,產生氨和碳酸。土壤脲酶活性與土壤的微生物數量、有機物質含量、全氮和速效氮含量呈正相關。土壤脲酶活性反應了土壤的氮素狀況。

            測定原理:

            利用靛酚藍比色法測定脲酶水解尿素產生的NH3-N。

            需自備的儀器和用品:

            可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。

            試劑的組成和配制:

            試劑一:甲苯2mL×1 瓶,4℃保存;(自備)

            試劑二:粉劑×1 瓶,臨用前加入9mL蒸餾水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的試劑4℃保存;

            試劑三:液體19mL×1 瓶,4℃保存;

            試劑四A 液:液體×1 支,4℃保存;

            試劑四B 液:液體×1 瓶,4℃保存;臨用前將A 液倒入B 液中混合,待用;用不完的試劑4℃保存一周;

            試劑五:液體2mL×1 瓶,4℃保存;

            測定步驟:

            1、培養

          測定管

          對照管


          風干土樣(g)

          0.05

          0.05

          試劑一(μL)

          20

          20

          振蕩混勻,使土樣全部濕潤,室溫放置15min

          試劑二(μL)

          90


          蒸餾水(μL)

          90


          試劑三(μL)

          190

          190

            混勻,放入37℃水浴培養24h 后,10000g 25℃離心10min,取上清液。

            2、將培養結束的上清液稀釋10倍(取0.1mL上清液,加入0.9mL蒸餾水)。

            3、測氨量(在微量石英比色皿或96孔板中加入下列試劑)

          測定管

          對照管


          稀釋后的上清液(μL)

          80

          80

          試劑四(μL)

          15

          15

          試劑五(μL)

          15

          15

          充分混勻,室溫放置20min

          蒸餾水(μL)

          90

          90

            混勻,于578nm處,蒸餾水調零,讀吸光值A,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。

            脲酶活力計算

            a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

            標準條件下測定的回歸方程為y=0.0915x +0.0373;x為標準品濃度(μg/mL),y為吸光值A。

            單位的定義:每天每g土樣中產生1μg NH3-N 定義為一個酶活力單位。

            脲酶活力(μg/d/g 土樣)=(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V 反總÷W÷T

            =656×(ΔA -0.0373)

            10:稀釋倍數;T:反應時間,1d;V 反總:反應體系總體積:0.3mL;W:樣本質量,0.05g。

            b.用96孔板測定的計算公式如下

            標準條件下測定的回歸方程為y=0.04575x+0.0373;x為標準品濃度(μg/mL),y為吸光值A。

            單位的定義:每天每g土樣中產生1μg NH3-N 定義為一個酶活力單位。

            脲酶活力(μg/d /g 土樣)=(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V 反總÷W÷T

            =1312×(ΔA -0.0373)

            10:稀釋倍數;T:反應時間,1d;V 反總:反應體系總體積:0.3mL;W:樣本質量,0.05g。

          點擊進入優選生物展臺查看更多 來源:教育裝備采購網 作者:上海酶科生物科技有限公司 責任編輯:陽光 我要投稿
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