這個坑，別栽了！如何應對ELISA基質效應？
2001年6月,美國曾爆出過一個大新聞：因為臨床診斷中，hCG 免疫檢測試劑盒得到了假陽性結果，使一位名叫Jennifer Rufer的女性被誤診為癌癥，因此經歷了長期化療、肺部手術、甚至子宮切除。當事人把醫院和診斷試劑公司告上法庭，獲得了1620萬美元的賠償，創下當時醫療事故的最高賠償金額。
勝訴后的Jennifer Rufer
痛苦的遭遇，巨額的賠償，就因一個hCG檢測假陽性結果而起，這太坑了！法院把責任判給了診斷試劑公司和醫院，但這事的始作俑者其實是一種被稱為“基質效應”的免疫檢測干擾現象。
基質效應
基質是指樣品中目標分析物以外的部分，由于基質成分會對分析過程有顯著干擾，影響分析結果的準確性。業內把這些影響統稱為基質效應（Matrix Effects）。這是免疫檢測方法開發和使用中需要避開的大坑。
Jennifer Rufer事件就是一個典型的基質效應造成假陽性的案例。該hCG試劑盒用的抗體是鼠源的，業界觀點認為部分人群血液含有抗鼠抗體（HAMA），它們對鼠源的捕獲抗體和檢測抗體都有高親和力，會造成基質效應，導致了假陽性。
如何評估基質效應
基質效應的原因錯綜復雜，但不用擔心，有兩種簡單的方法可以用來評估基質效應。
1. 線性稀釋：
一般來講，抗原和捕獲/檢測抗體之間的結合作用很強，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結合，而造成基質效應的非特異結合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結合造成的干擾會逐步減少，測量值也更接近真實值。沒有基質效應時，無論如何稀釋，測量值都和真實值吻合。而有基質效應時，稀釋會造成非特異性結合比例的減少，測量值也相應地產生很大改變：
前文提到，基質效應導致的結果有假陰性和假陽性兩種，在線性稀釋時就可以辨別出來。下圖是兩組實測的ELISA產品線性稀釋的對比結果，不同品牌的ELISA 試劑盒表現差距非常大：
圖中的縱坐標代表的是回收率。定義用原液直接檢測的值為100%，不同稀釋比下的測量值先乘上稀釋比換算出濃度，再除以原液直接檢測的值，比值的百分數，就是回收率。
左圖的黃色線，和右圖的紅色線，曲線平直，回收率穩定在90-110%，很好地控制了基質效應的干擾。左圖的紫色線，回收率隨線性稀釋嚴重偏離100%，說明存在顯著的基質效應；而回收率升高的趨勢，說明稀釋前的真實濃度被壓低，對應基質效應是假陰性。右圖的綠色線也嚴重偏離100%，但回收率隨稀釋降低，于左圖紫色線正好相反，屬于明顯的假陽性基質效應。
2. 摻入/回收率實驗（Spike/Recovery Assay）
基質效應還可以通過分析物的摻入/回收率實驗發現，將低、中和高濃度的分析物摻入到已測定過濃度的樣本中，摻入前后實測到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現?；厥章式橛?0-120%，才符合標準。
R&D Systems 讓您免受基質效應折磨
基質效應可以通過產品研發階段的優化盡可能去消除的。在ELISA試劑盒領域，R&D Systems是行業金標準，產品是高品質的代名詞，其中一個質量控制指標就是針對基質效應的產品優化:
1. 量身定制的緩沖液系統
優化緩沖液是消除基質效應的重要一環，R&D Systems進行ELISA試劑盒研發時，資深專家們會根據產品類型進行系統的緩沖液優化，為每種分析物量身定制最佳的緩沖液組合：
Quantikine ELISA Kit包含多種緩沖液，主要是Assay Diluent和Calibrator Diluent兩種稀釋液，對于差異較大的樣本，如細胞上清對比血清/血漿，會有專門的稀釋液分別對應。這些優化后的緩沖液體系能很好消除基質效應。
2. 排除交叉反應
當檢測某個分析物時，其他相關因子或類似結構因子如果有非特異性結合，也會導致基質效應。為此，R&D Systems在Quantikine ELISA Kit研發時會進行詳盡的交叉反應測試：用相關因子單獨測試有無非特異性結合，將相關因子和分析物同時測試看是否存在干擾。
R&D Systems進行大量優化，確保沒有明顯的交叉反應和干擾，通過驗證的相關因子都記錄在Quantikine ELISA Kit的說明書中，供您參考：
3. 嚴格的基質效應測試
R&DSystems 生產的所有Quantikine ELISA Kit，都必須通過嚴格的基質效應測試，包括線性稀釋和摻入/回收率實驗，并把測試結果記錄在說明書中：
