B0D5基本原理：
定義;生化需氧量（BOD5）定義為水中需氧微生物消耗溶解氧的量，當樣品放在培養箱中，培養溫度為20℃培養五天時，測定所消耗溶解氧的含量來確定水樣的BOD5值
生化需氧量（英文縮寫BOD），是在特定條件下，通過水中需氧微生物的繁殖和呼吸作用，分解水中有機物質時所消耗或所需要溶解氧量。水中的BOD5值通常以樣品在20℃放置5天所消耗溶解氧的量(mg/L數)表示，記為“BOD5”。
2、測定原理：
將預選好量程并按量程范圍量好體積的水樣倒入培養瓶中，在主機攪拌器上連續攪拌。并將主機和培養瓶放入培養箱中。調節培養箱內溫度為20℃±1℃，待樣品恒溫后行五日培養。培養瓶中的水樣在連續攪拌的情況下保證了足夠的溶解氧供微生物行生化反應。水樣中的有機物經過生物氧化作用，轉變成氮、碳和硫的氧化物。在這過程中，從水樣中溢出的氣體二氧化碳被氫氧化鈉(或氫氧化鉀)吸收。此時，培養瓶中空氣壓力減少量，相當于微生物所消耗的溶解氧含量，即水樣BOD5值與瓶中空氣壓力減少的程度成正比，所以BOD5的值可以由空氣壓力減少值來測定，增加或減少所取樣品的量可以增加或降低壓力減少值。這樣操作者就能準確測量很寬范圍的BOD5值。培養瓶中空氣壓力的變化是通過壓力計中汞柱度的變化來行檢測的，通過簡單的計算即能讀出水樣的BOD5值。
影響BOD5測定的因素
—溶解氧：
冬季所取的樣品由于試驗溫度設在20℃，使得溶解氧過飽和，夏季所取的樣品在20℃時溶解氧可能欠飽和。在BOD5測定前應對這些樣品行攪拌和曝氣，以便使溶解氧調節到20℃飽和點左右。
—pH：
應調節試驗水樣的pH為6.7～7.5（點為pH 7.2），BOD5讀數下降可能是由于正在試驗樣品的pH值出了這個范圍，含有大量酸或堿的樣品BOD5讀數可能會低于實際含量。
酸性或堿性水樣應用適當濃度的Na0H或H2S04中和。
如果業廢水中含有酸性或鹽的氧化物，或者需要倍稀釋，對標準五日BOD5測定，可使用pH 7.2的磷酸緩沖液作為稀釋劑。
—溫度：
實驗時將儀器放大器放置在20℃±1℃的培養箱中。BOD的測定也能出這溫度范圍，例如，在35℃或37℃時，測定BOD所需要的時間可以縮短為34小時，其測定結果與五日20℃ BOD5測定相似。提溫度所獲得的BOD值與五日20℃條件下測定的結果有很好的相關性。
如果在采樣時樣品溫度過20℃，或樣品溫度不足20℃，可將樣品放在培養箱中恒溫。在樣品測定前要求對樣品行處理。
—稀釋：
直讀式BOD5測定儀測定范圍為0～1000mg/L。如果試驗樣品的BOD5估計值于1000mg/L可用稀釋水稀釋樣品。所加入的稀釋水也應保持為20℃，并曝氣使氧達到飽和，如需要若干份相同的樣品試驗時，應稀釋足夠量的原水樣，并從稀釋樣中取出與量程對應的體積。例如，當試驗原水樣稀釋兩倍時，稀釋倍數為2；當原水樣按1:10稀釋時，則應為10，所測結果應乘上稀釋倍數。
—接種：
BOD5實驗要求水樣含有供生物氧化的有機物和適量的氧化有機物的需氧細菌，以及吞食有機物和增需氧細菌生長的其他微生物。如果水樣中根本沒有或幾乎沒有這類微生物，就對水樣按定比例加入這類微生物溶液。這個過程與生活污水不同，業廢水可能不含有足夠量的細菌以供樣品中所含有機物的生化分解，如果所測定的樣品為這種廢水，應加入接種溶液。
A接種方法
制備接種溶液
接種溶液
用于接種的溶液為20℃放置24～36小時的未經處理新鮮生活污水的上清液。在下次實驗中，若要使用以前測定過的水樣作為接種液應經濾紙過濾，這種濾液在冷藏（約20℃）、避光的條件下保存，般在個月內是有效的。將準備測定的樣品放入培養瓶中，使用吸管將定量的接種液加入到樣品中（根據樣品量）。按步驟測定BOD5，五日后獲得的讀數可以作為試驗樣品真實的BOD5值。
注意：當使用上述方法接種時。不校正接種的BOD5讀數。因為所加入接種液的量相對水樣量來說實在太少了，以致于不影響BOD5的讀數。如果上述方法未能引起水樣中有機物的生物分解，可增加所加入接種液的量。如果由于接種液的加入影響了BOD5讀數，可將接種液與樣品同時實驗行平行樣測定。
接種量常取5％，10％二種
—數據處理：
對于既無稀釋又無接種預處理的樣品，只需將儀器上的汞壓力計的讀數讀出，乘上所選量程的標尺系數，即得到樣品BOD5值。
對于作了稀釋和接種預處理的樣品，可把汞壓力計讀數讀出，樣品實際BOD5按下面公式計算：
樣品BOD5讀數×標尺系數-接種液BOD5讀數×標尺系數×接種液%
BOD5（mg/L）＝ ×稀釋倍數
樣品液%
式中：樣品BOD5讀數——對應樣品的汞壓力計讀數，厘米；
接種液BOD5讀數——對應接種液的汞壓力計讀數，厘米；
標尺系數——根據所選量程范圍從取水樣量表1中查得；
接種液％——體積百分比，％；
樣品液％——體積百分比，％。
例：有污水樣品，估計其BOD5值過1000mg/L，因而作了稀釋預處理，稀釋倍數為2倍（即份樣品加份稀釋水）選取0～600mg/L檔量程，培養五天后汞壓力計讀數8.8厘米汞柱。
8.8×60－0
BOD5值（mg/L）＝ ×2＝1056（mg/L）
例二：有業廢水水樣估計其BOD5值約為80mg/L，現有合適的生活污水對其接種培養測定，接種量為10％（即廢水水樣：生活污水=9：1）
生活污水的BOD5值約在30mg/L左右，現選取0～50mg/L量程檔，業廢水選取0～100mg/L量程檔（取樣量按說明書表1提供的各檔量程取樣量分別用量筒量之）平行樣試驗。五天后廢水水樣與生活污水水樣汞壓力讀數分別為7.8厘米汞柱和4.0厘米汞柱。此種廢水BOD5值為：
7.8×10－4.0×5×10％
BOD5值（mg/L）＝ ＝ 84.4（mg/L）
90%
例三、有種業廢水有毒，估計BOD5值約700mg/L左右，測定前對樣品行了10倍稀釋，同時用生活污水行接種，接種液BOD5值60mg／L左右，接種量為10％，查表1，經過處理的業廢水和接種液取0～100mg／L量程檔行取樣試驗，培養五天后汞壓力計讀數分別為5.2厘米汞柱和6.1厘米汞柱。此種業廢水BOD5為：
5.2×10－6.1×10×10％
BOD5值（mg/L）＝ ×10＝510（mg/L）
90%
