大腦中動脈阻塞 (middle cerebral artery occlusion，MCAO) 是目前最常用的局灶性腦缺血模型，MCAO 模型先阻斷頸外動脈(ECA)及其分支，且阻斷翼腭動脈(PPA)，以切斷顱外來源的側副循環血流。從ECA 插入尼龍線，經頸內動脈(ICA)到大腦前動脈(ACA)，機械性阻斷大腦中動脈(MCA) 發出處的血供來建立大腦中動脈缺血模型。此模型可在無麻醉狀態下拔出尼龍線，恢復血流，實現再灌注。 線栓法具有不開顱、效果肯定、可準確控制缺血及再灌注時間的優點，用于研究神經元對缺血的敏感性、耐受性，藥物療效觀察以及再灌注損害和治療時間窗較為理想，同時也具有對全身影響小、動物存活時間長的特點，適于慢性腦損傷的研究?？刂坪靡鬃円蛩?，可避免實驗結果的不穩定性。
1、主要器材
(1)缺血前準備：腦立體定位儀、(小鼠適配器)、微量注射泵、微量注射器、顱鉆
(2)缺血模型制作：氣體麻醉機、異氟烷、體視顯微鏡、冷光源、手術臺、術后保溫箱、腦模具、手術器械包
(3)缺血模型評價：神經功能評價法(BBB評分)、TTC染色、病理學評價
(4)缺血后行為檢測：抓力測試儀、轉棒儀......
2、實驗動物
(1)SPF級Wistar大鼠，健康，雄性，體重為250-300g。
(2)SPF級C57小鼠，健康，雄性，體重為18 - 25g，實驗Protocol和視頻，請點擊觀看和下載: Click Here
3、實驗分組
實驗分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組，每組15只動物。
4、建模方法(以大鼠為例)
(1)1.5-2%異氟烷氣體麻醉大鼠，頸部備皮，消毒，插入肛溫探頭，保持體溫在37±0.5℃。
(2)頸部正中切口，暴露右側頸總動脈，頸內動脈和頸外動脈。使用6-0絲線在距離頸總動脈分叉4mm處結扎頸外動脈遠心端，在頸外動脈穿入另一根6-0絲線，在靠近頸總動脈分叉處打一個活結。
(3)使用動脈夾夾閉頸總動脈。在距離頸總動脈分叉處3mm處的頸外動脈上剪一個小口，將一根頭端處理過的0.33mm直徑的尼龍線從小口中插入，進入頸內動脈，并向內插入大腦中動脈，尼龍線的插入深度距離頸總動脈分叉處約16±1mm。
(4)缺血后90min拔掉線栓，用6-0絲線結扎外動脈近心端，用3-0絲線縫合頸部傷口，活力碘消毒傷口，將大鼠放在加熱墊上，待清醒后放入恒溫撫養箱飼養。
(5)術后24h，對小鼠進行神經功能評分，然后繼續麻醉大鼠，取大腦切片、進行TTC染色和病理染色。
5、模型的評價
(1)神經功能缺失體征評分
參考 Longa 及Bederson 的5 分制法在動物麻醉清醒后24h 進行評分，分值越高,說明動物行為障礙越嚴重。
0 分：無神經損傷癥狀
1分：不能完全伸展對側前爪
2分：向對側轉圈
3分：向對側傾倒
4分：不能自發行走,意識喪失
(2)TTC染色
麻醉大鼠后 ，取大鼠腦組織 ，放入 -20 ℃冰箱冷凍 30min 30min。用 PBS配置 1% TT C(W/V )，37 ℃水浴至 TTC 溶解， 將凍好的腦組織切片 ，置于 10ml TTC 溶液 中， 37 ℃恒溫孵育 10min。不時翻動腦片，使 組織均勻染色。正常腦染色后呈鮮紅，而梗死區呈蒼白。
附：小鼠缺血2h后TTC染色效果圖，如下：
(3)病理學評價
取腦后用 4% 多聚甲醛溶液 固定，蔗糖溶液脫水后經 固定，蔗糖溶液脫水后經 固定，蔗糖溶液脫水后經 OCT 包埋做冰凍切片 ，包埋做冰凍切片 ，10um ， 做尼氏染色， 做尼氏染色可做梗死面積的評價。
