植物葉片、組織呼吸速率的測定
實驗準備:
儀器:氧電極系統一套;30ml針筒,剪刀,雙面刀(或單面刀),1ml移液器,鑷子,吸管,吸水紙,打孔器。
試劑:(1)測定介質50mmol/L pH7.5的Tris-HCl緩沖溶液。稱取6.05克Tris(三羥甲基氨基甲烷) 800~900ml水中,滴加1mol/L HCl,調pH7.5,加水1000ml。除此之外,測定介質還可用磷酸、Hepes、Tricine等pH7.5 50mmol/L的緩沖液。僅用pH7.5的水溶液也可作測定介質。
(2)0.5mol/L KCl:稱取1.86克KCl溶于50ml蒸餾水中。
實驗步驟:
1準備好所需的儀器和試劑,安裝好氧電極,并與計算機連接,校正(詳細操作步驟見廠家提供的說明書或漢語說明書)。
2材料準備:取小麥、水稻等植物葉片(組織),用打孔器取一定面積(或稱取一定重量)(一般按每ml反應體積需0.5cm2葉碎片取樣),
將葉塊放入盛有測定介質的小燒杯中,然后將小燒杯放到真空器中進行抽氣,排出葉片(組織)細胞間隙內的氣體,使葉片沉到底部?;蛘?/p>
將葉碎塊倒入30ml注射器中,進行手工真空滲入,排除葉內氣體,使葉塊下沉。然后將下沉的葉塊取出,用剪刀剪成面積約為2mm2的碎
片,放入氧電極反應杯中。
3呼吸速率的測定:
在盛有葉碎片的反應杯中加入1~2 ml的測定介質,然后放入磁轉子。啟動磁轉子攪拌溶液,平衡1分鐘左右后,開始測定,3~5min后
停止測定。氧電極的使用方法詳見漢語說明書。
注意:如果使用的是透明反應杯,測定葉片的呼吸速率時需要將反應杯遮光。
4反應結束后,清洗反應杯。重復步驟3,所有實驗結束后,按說明書操作,清洗反應杯,清潔電極,保持電極的干燥。(注意事項見說明書)
5呼吸速率的計算:從記錄曲線得到單位時間氧的變化量,根據葉片面積和反應介質的體積計算出樣品的呼吸速率。
完成該實驗可以選用的氧電極型號有:Leaflab2(只能用于測定葉片)、Chlorolab2、Chlorolab3、Oxygraph、Oxytherm。