Greiner凍存管安全使用須知
凍存管使用不當， 會有爆、生物安全威脅及人身傷害等風險凍存管使用不當， 會有爆、生物安全威脅及人身傷害等風險凍存管使用不當，會有爆、生物安全威脅及人身傷害等風險
細胞凍存流程 細胞凍存流程
用預熱過的 PBS 對細胞進行沖洗，棄去 對細胞進行沖洗，棄去 PBS 后，加入含 后，加入含 后，加入含 EDTAEDTAEDTAEDTA的胰酶消 化液對細胞進行消(薄地覆蓋表面即可，濃度須 化液對細胞進行消(薄地覆蓋表面即可，濃度須 化液對細胞進行消(薄地覆蓋表面即可，濃度須 根據不同的細胞系進行調整)。 根據不同的細胞系進行調整)。
37 ℃消化 細胞 3–5分鐘，不可過度消化。
一旦細胞從底部脫離，即可用含血清培養基終止消化并吸管輕吹 一旦細胞從底部脫離，即可用含血清培養基終止消化并吸管輕吹 一旦細胞從底部脫離，即可用含血清培養基終止消化并吸管輕吹 一旦細胞從底部脫離，即可用含血清培養基終止消化并吸管輕吹 一旦細胞從底部脫離，即可用含血清培養基終止消化并吸管輕吹 打以重懸細胞 。
離心( 500 00 00 × g, 5 ming, 5 ming, 5 ming, 5 ming, 5 ming, 5 ming, 5 ming, 5 min)細胞重懸液以沉淀， )細胞重懸液以沉淀， 棄上清， 用含血清培養 基對細胞沉淀進行重懸。
對細胞進行計數(推薦 Neubauer chamberNeubauer chamberNeubauer chamberNeubauer chamberNeubauer chamberNeubauer chamberNeubauer chamberNeubauer chamberNeubauer chamberNeubauer chamber Neubauer chamberNeubauer chamberNeubauer chamberNeubauer chamberNeubauer chamber)。
離心( 500 500 500 500 × g, 5 ming, 5 ming, 5 ming, 5 ming, 5 ming, 5 ming, 5 ming, 5 min)細胞重懸液，棄上清。用適當體積含血培養基 )細胞重懸液，棄上清。用適當體積含血培養基 重懸細胞。
將細胞重懸液以 1:11:1 比例與凍存液( 比例與凍存液( 60% 培養基， 培養基， 20% FCS20% FCS20% FCS 20% FCS 20% FCS，20% DMSO20% DMSO20% DMSO20% DMSO20% DMSO20% DMSO20% DMSO20% DMSO) 進行混合后轉移至 Cryo.sCryo.sCryo.s Cryo.sCryo.sTM 凍存管中。細胞的濃度應為 1–5 × 10 6 細胞 /ml 。
含有細胞的凍存管須按照 .1 K/min1 K/min1 K/min1 K/min1 K/min1 K/min1 K/min的冷卻速率進行凍。將存管插在 的冷卻速率進行凍。將存管插在 的冷卻速率進行凍。將存管插在 含異丙醇的凍存 盒小室并放置在 .70 ℃的冰箱中可以實現上述要求。如果 的冰箱中可以實現上述要求。如果 的冰箱中可以實現上述要求。如果 凍存液中含有其他類型的樣品時，則需要將 凍存液中含有其他類型的樣品時，則需要將 Cryo.sCryo.sCryo.s Cryo.sCryo.sTM 凍存管在 .20 ℃， .70 ℃或者液氮的氣相層進行 直接 凍存。為確保每個樣品的均一效 果， 4 ml 和 5 ml 的 Cryo.sCryo.sCryo.s Cryo.sCryo.sTM 凍存管需在 .20 ℃過夜凍存后再轉移至 70 ℃ 或者液氮的氣 相層。
然后將 Cryo.sCryo.sCryo.s Cryo.sCryo.sTM 凍存管轉移至液氮罐。為避免污染(例如支原體)并考 凍存管轉移至液氮罐。為避免污染(例如支原體)并考 凍存管轉移至液氮罐。為避免污染(例如支原體)并考 凍存管轉移至液氮罐。為避免污染(例如支原體)并考 慮到安全預防規范的要求，建議將 慮到安全預防規范的要求，建議將 Cryo.sCryo.sCryo.s Cryo.sCryo.sTM 凍存管放置在 液氮上方的氣 相層而非液氮。
細胞復蘇流程
從液氮罐中取出凍存管后立即將其置于37℃水浴中進行解凍，解凍時間約1–2min，解凍時需要不停搖動凍存管令其盡快融化。此步解凍過程越快越好。
將解凍好的細胞懸液轉移到15ml離心管，并立即添加一定量含血清培養基進行混合。
離心(500 ×g, 5 min)細胞重懸液，棄去上清。用適當體積的含血清培養基對細胞沉淀進行重懸后分裝到1個或多個細胞培養瓶中。
請遵循細胞接種時的推薦濃度進行培養。
接下來的12個小時細胞需要靜置培養。
細胞換液可在24–48h后進行。
Cryo.sTM凍存管安全使用建議
使用凍存管儲存樣本時，嚴格要求應把凍存管放入液氮的氣相層或冰箱中保存!如果凍存管儲存于液氮液體中，液氮有一定幾率會滲入凍存管內部，復蘇時液氮氣化導致管內外壓力不平衡，這樣極易造成凍存管的炸裂，并具有生物危害性。
操作凍存管復蘇，全程使用安全防護設備，建議穿實驗服、戴棉質手套且在安全的實驗臺上進行操作。條件允許情況下，請佩戴護目鏡或防護面罩。由于夏季室內溫度會高于冬季，請格外小心。
凍存細胞儲存過程中，凍存管的冷凍溫度須均勻。不均勻的受凍將會導致冰塞的產生，冰塞會抑制兩側的液體溫度傳遞進而產生危險的高壓力并導致凍存管受損。
凍存的樣本量不要超過凍存管要求的最大工作體積。
