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          上海古朵:ELISA試劑盒標準操作步驟

          教育裝備采購網 2017-06-26 16:58 圍觀630次

            ELISA標準操作要點:

            優質的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA 檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的高質量的純化水電導率小于1.5μs/cm。

            1.加樣

            加樣時應將所加物加在ELISA 板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出。

            2保溫

            在建立ELISA方法作反應動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經

            1-2 小時,產物的生成可達頂峰。為避免蒸發,板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,反應板不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。應注意溫育的溫度和時間應按規定力求準確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成,采用水浴會造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應,邊上的值會偏高,建議為了客觀的判斷結果,將質控放在非邊緣位置。

            3洗滌

            洗滌在ELISA 過程中雖不是一個反應步驟,但卻決定著實驗的成敗。ELSIA 就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來??梢哉f在ELISA 操作中,洗滌是最主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。

            洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質與固相載體的結合,并借助于親水基團和水分子的結合作用,使蛋白質回復到水溶液狀態,從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。

            洗板時注意各種試劑盒的洗液不要混用。如果洗液需要稀釋,應按要求稀釋,所用的水電導率最好在1.5us/cm 之下,洗液如果結晶應待其融解后配制。保證洗板浸泡時間為40 秒左右,孔內液體被洗板機吸收得越干凈洗滌效果更好,手工洗板防止洗液在孔內形成氣泡。

            上海古朵生物科技有限公司主要經營:elisa試劑盒專賣,進口elisa試劑盒,原裝elisa試劑盒,elisa試劑盒廠家,胎牛血清,進口胎牛血清,國產胎牛血清,優質胎牛血清等產品,產品種類齊全、現貨供應、質量長期保障,歡迎各位新老客戶惠顧,如需咨詢相關產品信息或產品詳細說明請致電聯系或聯系在線客服。

          來源:教育裝備采購網 作者:上海古朵生物科技有限公司 責任編輯:段河偉 我要投稿
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