五味子,習稱北五味子,為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis ( Turcz. ) Baill. 的果實,具有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心之功效。研究發現,北五味子含木脂素、有機酸、揮發油、多糖等成分。其中,五味子多糖具有保肝、抗疲勞、免疫促進、抗氧化及抗衰老和抗腫瘤等藥理作用,具有較好的臨床療效。由于多糖質量是保證五味子臨床療效的重要前提,因此就對五味子中多糖的質量評價,尤其是其質量分數測定的準確性有了更高的要求。
目前檢測五味子中多糖的方法主要有高效液相色譜法和比色法,前者因高純度的五味子多糖對照品難以獲得等因素的制約而較少使用,而后者作為測量多糖的經典方法,操作簡單易行,結果準確可靠,在五味子多糖的研究中得到了廣泛的應用。上海創賽提供五味子酚,69363-14-0,HPLC≥98%,C78-A0823-20mg,價格640元。
目前測量五味子多糖的比色法主要有硫酸苯酚法、硫酸蒽酮法、3,5-二硝基水楊酸法( DNS) 等,均是以葡萄糖為對照品,計算出樣品中多糖的質量分數。
硫酸苯酚法和硫酸蒽酮法是通過硫酸水解多糖,脫水生成糠醛或其衍生物,與相應的顯色劑顯色后在特定波長處有最大吸收,硫酸苯酚法和硫酸蒽酮法顯色原理大致相同,均是多糖在強酸性條件下水解成單糖,單糖再進一步脫水形成糖醛衍生物而顯色。然而本實驗結果顯示,兩種方法測定五味子中多糖的結果相差近10%,原因可能是組成該成分的不同單糖與硫酸苯酚或硫酸蒽酮試劑在反應條件方面有不同,從而導致結果的差異。有關五味子單糖的組成及兩種顯色方法的最佳反應條件尚有待進一步研究。上海創賽提供ELISA試劑盒96T/48T,大鼠核因子κB受體活化因子配基Elisa試劑盒,LH-E10218RA-96T,價格1700元。
DNS 法是通過DNS 試劑與還原糖共熱產生棕紅色化合物,并在特定波長處有最大吸收,然后測定總糖供試液和單糖供試液中的單糖質量分數,計算時再將單糖供試液的單糖質量分數從總糖供試液的單糖質量分數中減去,最終算出多糖質量分數。用DNS 法測定單糖供試品溶液中單糖質量分數時,發現其吸收值極小,幾乎可以忽略不計。這一結果表明五味子多糖提取液中單糖質量分數較低,原因可能是在水提取五味子多糖前用80%乙醇回流,去除木脂素,單糖等雜質,消除了它們對多糖質量分數測定的影響,因此用DNS 法的優勢不明顯。
從各方面的數據分析比較后發現,采用苯酚法測定結果比較穩定,操作簡單易行,因而可認為此法是測定五味子中多糖較為理想的方法。但因苯酚容易氧化,見光或遇氧即逐漸氧化成淡紅色物質,因此在測定中應該避光,且操作要迅速。
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