鼠尾膠原蛋白的使用方法
1、細胞培養器皿的表面包被
推薦濃度：1-5ug/cm2，以包被濃度為 2 ug/cm2 為例：
用無菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/ml。確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面，開蓋在超凈臺上過夜晾干。 也可以在室溫放置 1小時后，用PBS洗3-4次后直接使用。
包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3個月以上的時間。
2、三維膠原的制備
鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來中和。
需要的溶液 ( 均需要 無菌 、 預冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水
A.不含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例)：將200ul生友鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結)，立即混勻。再加入100ul 10xPBS或10x培養液，混勻后立即加到培養器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。將培養器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10xPBS，使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。
B.含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例)：準備好懸浮于培養液的細胞，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結)，立即混勻。再加入23ul 10xPBS或10x培養液，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細胞懸浮液，混勻后立即加到培養器皿中。將培養器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當體積的細胞培養液，轉移到培養箱中培養。上海創賽提供鼠尾膠原蛋白I型,C20-200110-2ml,價格：280元
注：鼠尾膠原蛋白I型在室溫下pH中性時可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。
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