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        1. 教育裝備采購網
          第八屆圖書館論壇 校體購2

          細菌的莢膜染色方法簡介

          教育裝備采購網 2016-06-22 16:32 圍觀4392次

            一、實驗原理

            由于莢膜與染料間的親和力弱,不易著色,通常采用負染色法染莢膜,即設法使菌體和背景著色而莢膜不著色,從而使莢膜在菌體周圍呈一透明圈。由于莢膜的含水量在90%以上,故染色時一般不加熱固定,以免莢膜皺縮變形。

            二、實驗方法

            推薦以下四種染色法,其中以濕墨水方法較簡便,并且適用于各種有莢膜的細菌。如用相差顯微鏡檢查則效果更佳。

            1、負染色法:

            (1)制片:取潔凈的載玻片一塊,加蒸餾水一滴,取少量菌體放入水滴中混勻并涂布。

            (2)干燥:將涂片放在空氣中晾干或用電吹風冷風吹干。

            (3)染色:在涂面上加復紅染色液染色2—3min。

            (4)水洗:用水洗去復紅染液。

            (5)干燥:將染色片放空氣中晾干或用電吹風冷風吹干。

            (6)涂黑素:在染色涂面左邊加一小滴黑素,用一邊緣光滑的載玻片輕輕接觸黑素,使黑素沿玻片邊緣散開,然后向右一拖,使黑素在染色涂面上成為一薄層,并迅速風干。

            (7)鏡檢:先低倍鏡,再高倍鏡觀察。

            結果:背影灰色,菌體紅色,莢膜無色透明。

            2、濕墨水法

            (1)制菌液:加1滴墨水于潔凈的載玻片上,挑少量菌體與其充分混合均勻。

            (2)加蓋玻片:放一清潔蓋玻片于混合液上,然后在蓋玻片上放一張濾紙,向下輕壓,吸去多余的菌液。

            (3)鏡檢:先用低倍鏡、再用高倍鏡觀察。

            結果:背景灰色,菌體較暗,在其周圍呈現一明亮的透明圈即為莢膜。

            3、干墨水法

            (1)制菌液:加1滴6%葡萄糖液于潔凈載玻片一端,挑少量膠質芽胞桿菌與其充分混合,再加1環墨水,充分混勻。

            (2)制片:左手執玻片,右手另拿一邊緣光滑的載玻片,將載玻片的一邊與菌液接觸,使菌液沿玻片接觸處散開,然后以30度角,迅速而均勻地將菌液拉向玻片的一端,使菌液鋪成一薄膜。

            (3)干燥:空氣中自然干燥。

            (4)固定:用甲醇浸沒涂片,固定1 min,立即傾去甲醇。

            (5)干燥:在酒精燈上方,用文火干燥。

            (6)染色:用甲基紫染1—2min。

            (7)水洗:用自來水輕洗,自然干燥。

            (8)鏡檢:先用低倍鏡再高倍鏡觀察。

            結果:背景灰色,菌體紫色,莢膜呈一清晰透明圈。

            4、Tyler法

            (1)涂片:按常規法涂片,可多挑些菌體與水充分混合,并將粘稠的菌液盡量涂開,但涂布的面積不宜過大。

            (2)干燥:在空氣中自然干燥。

            (3)染色:用Tyler染色液染5—7min。

            (4)脫色:用20%CuSO4水溶液洗去結晶紫,脫色要適度(沖洗2遍)。用吸水紙吸干,并立即加1—2滴香柏油于涂片處,以防止CuSO4結晶的形成。

            (5)鏡檢:先用低倍鏡再用高倍鏡觀察。觀察完畢后注意用二甲苯擦去鏡頭上的香柏油。

            結果:背景藍紫色,菌體紫色,莢膜無色或淺紫色。

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            三、注意事項

            1、加蓋玻片時不可有氣泡,否則會影響觀察。

            2、應用干墨水法時,涂片要放在火焰較高處并用文火干燥,不可使玻片發熱。

            3、在采用Tyler法染色時,標本經染色后不可用水洗,必須用20%CuSO4沖洗。

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