一、原理:過氧化物酶廣泛分布于植物的各個組織器官中。在有過氧化氫存在下,過氧化物酶能使愈創木酚氧化,生成茶褐色物質,此產物在470 nm 處有最大光吸收值,故可通過測470 nm下的吸光度變化測定過氧化物酶的活性。
二、實驗材料:植物葉片
三、設備與試劑:電子分析天平,分光光度計,低速冷凍多管離心機,研缽,容量瓶,量筒,試管,吸管。
(1)100mmol/L 磷酸緩沖液(pH=6.0):[0.2M的Na2HPO412.3mL和NaH2PO487.7mL混合后稀釋2倍]
(2)反應混合液:100mmol/L磷酸緩沖液(pH6.0)50ml于燒杯中,加入愈創木酚28μl,于磁力攪拌器上加熱攪拌,直至愈創木酚溶解,待溶液冷卻后,加入30%過氧化氫19μl,混合均勻,保存于冰箱中。
四、操作步驟
1.稱取植物材料1g,放入研缽中,適量液氮研磨成粉末,加適量的磷酸緩沖液于研缽中研磨成勻漿,以4000r/min離心15分鐘,上清液轉入100ml容量瓶中,殘渣再用5mL磷酸緩沖液提取一次,上清液并入容量瓶中,定容至刻度,貯于冷處備用。
2.取光徑1cm比色杯2只,于1只中加入反應混合液3mL和磷酸緩沖液1mL(或加熱煮沸5 min 的酶液),作為校零對照,另1只中加入反應混合液3ml,上述酶液1ml(如酶活性過高可稀釋之),立即開啟秒表記錄時間,于分光光度計上在波長470nm下測量吸光度值,每隔0.5min(30S)讀數一次,連續讀數3次。
五、結果計算: 以每分鐘內A470變化0.01 為1 個過氧化物酶活性單位(U)
中文名稱:愈創木酚 CP,>99.0%(GC)
英文名稱:Guaiacol CP,>99.0%(GC)
品牌:博飛美科
貨號:C16-G10224-100g
CAS: 90-05-1
分子式:C7H8O2
分子量:124.14
化學性質:白色或微黃色結晶或無色至淡黃色透明油狀液體。有特殊芳香氣味。 略溶于水和苯。易溶于甘油。與乙醇、乙醚、氯仿、油類、冰醋酸混溶。
用途:用于醫藥、染料及香料中間體。用于配制咖啡、香草、熏煙和煙草等型香精。用于染料的合成,也用作分析試劑。在醫藥上用以制造愈創木酚磺酸鈣,在香料工業上用以制造香蘭素和人造麝香等。檢驗銅、氫氰酸和亞硝酸鹽。
CANSPEC品質提供的愈創木酚,Guaiacol,CP,>99.0%(GC)|90-05-1性能卓越,其優秀的品質滿足您不同實驗的多種需求。
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