一般情況,我們開始流式實驗時,首先要選擇抗體,必然要涉及到熒光的選擇,盡量使這些熒光的補償值降到最低。
1.我們需要了解我們用的流式細胞儀的硬件設施(激光,濾光片)
2.選擇合適的熒光染料,盡量利用到你的儀器上的所有激光,這樣可以使這些熒光交叉可能性達到最小。一般四種顏色或以下的比較好選,常用:FITC,PE,APC,Percp-cy5.5。當然還有其他很多種組合 我們也可以用BD或ebioscience網站上的軟件進行選擇界面有點不同,但基本原理就是設置好你需要集中顏色,用的是哪臺儀器,幾根激光,軟件就會自動列出合適的染料。
3.選擇好熒光染料以后,就是將這些染料與你的抗體聯系起來,這就要根據自己實驗的需要了,有些常用的抗體上可能標記有很多種染料,但有些不常用的選擇性就不太多,所以可以先定一些無法選擇的抗體,然后就是根據表達量少的標記熒光信號強的染料,認為重要的抗體標記熒光信號強的,常用熒光的強弱如下:PE>APC>PE-CY7>Percy-cy5.5>FITC>APC-CY7。
4.抗體確定好后,就可以開始預實驗了:包括樣品的處理,抗體的濃度,時間,這些都需要一定的try。
5.正式開始實驗需要做blank/isotype,單染(兩兩調補償),復染(sample)
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品牌 |
抗體名稱 |
貨號 |
規格 |
市場價 |
折扣價 |
Abcam |
Anti-CD68 |
ab201973 |
100µg |
3996.00 |
2797.00 |
Abcam |
Anti-GAPDH |
ab9485 |
100µg |
4459.00 |
3121.00 |
Abcam |
Anti-B7-H1 |
ab209960 |
100µg |
4718.00 |
3302.00 |
Abcam |
Anti-HMGB1 |
ab18256 |
100µg |
4476.00 |
3133.00 |
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