胎牛血清使用中常見問題及解決方案

　　1、 如何儲存和解凍血清才不會使產品質量受損?

　　將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內(由于血清結凍時體積會增加約10 %， 必須預留此膨脹體積之空間，否則易發生污染或容器凍裂之情形)，再放回冷凍。

　　2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?

　　沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產品性質。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。

　　3、 如何避免血清中產生沉淀?

　　按如下操作可避免沉淀的產生：

　　(1)解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生。

　　(2) 血清分裝凍存時，須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。

　　(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發生沉淀

　　(4) 勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質。

　　(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

　　(6) 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

　　4、 培養基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎?

　　一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

　　5、 為什么要熱滅活血清?

　　加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究，培養ES細胞、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

　　6、 有必要做熱滅活嗎?

　　實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間，更確保血清的質量!

　　7、細胞培養中出現黑點是污染嗎?如何處理?

　　一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養細胞生長的狀態，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞，生長狀態良好，與黑點出現前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現可能與以下幾種情況有關：

　　(1)細胞生長過老，破碎的細胞殘骸;

　　(2)血清質量不好，反復凍融的結果;

　　(3)配制培養基的pH值偏高，不宜細胞生長;

　　(4)配制培養基的水質、容器不合格?？蓱秒x心、過濾的方法去除這些黑點;

　　(5)培養原代細胞中出現小黑點，可能是原代組織中的雜質，多次傳代可以消除。

　　8、小牛血清和胎牛血清有何區別與注意事項?

　　來源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。組份與比例不同：兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質等組份與比例不同，用途與用法不同：某些細胞必需胎牛血清才能生長，而有些細胞只需小牛血清即可，使用濃度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。

　　血清保存和使用須注意：血清應保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時 ，應先將血清至于2-8℃冰箱，并經常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，絕對不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會增加，血清在解凍和熱滅活后，應按用量分裝并于-20℃保存，避免反復凍融。