Western Blot 技術交流第一期內我們通過裂解細胞，組織等步驟已經把蛋白提取出來，但提出來后要怎么知道提出的效果怎么樣，怎么才能在同等量上上樣。這就需要進行蛋白定量，目前用得最多的定量方法有兩種，一種是 BCA 法，一種是Bradford 法。下面我們詳細介紹下這兩種定量方法的原理與優缺點：
BCA 法：
BCA 蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。其原理是在堿性環境下 蛋白質分子中的肽鏈結構能與 Cu2+絡合生成絡合物，同時將 Cu2+還原成 Cu+。BCA 試劑可敏感特異地與 Cu+結合，形成穩定的有顏色的復合物。在 562nm 處有高的光
吸收值，顏色的深淺與蛋白質濃度成正比。使用本試劑盒檢測靈敏度高，對不同種類蛋白質檢測變異系數小，操作簡單。
Bradford 法：
Bradford法是最簡單和快速的比色蛋白定量方法。這一方法基于考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合后，產生藍色化合物，反應迅速而穩定。反應化合物在 465-595 nm 處有最大的光吸收值，化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關系，因此可檢測 595 nm 的光吸收值的大小計算蛋白的含量。
BCA 法
優點 1. 準確：變異系數遠小于考馬斯亮藍染色法(bradford 法)
2. 線性范圍寬，檢測靈敏，檢測范圍：20-2000 μg/ml
3. 與金屬離子、還原劑和螯合劑、去污劑兼容性好
4. 質量檢測標準曲線線性關系 R2 值一般為 0.998
缺點 1. 與 Bradford 法相比不能迅速檢測，需要 37℃孵育 30 min。
Bradford 法
優點 1. 與 BCA 法相比，使用本產品反應迅速，即加即檢
2. 靈敏度范圍為 100-1500 μg/ml
3. 質量檢測標準曲線線性關系 R2 值一般 0.980
缺點 1. 與金屬離子、還原劑和螯合劑、去污劑兼容性差
2. 精確度沒有 BCA 法高
