利用超高效色譜系統，可從干血斑的化學干擾物以及已沉淀大鼠血漿樣品的內源性物質中中成功分離出氟替卡松丙酸酯及昔美酸沙美特羅。
目的
為證實在利用與串聯四級桿質譜儀聯用的 ACQUITY UPLC® I-Class系統進行超高效色譜生物分析時，能夠將分析物從復雜基質中分離出來。
背景
精確檢測生物分析樣品需要一種具高特異性且高靈敏度的方法。LC/MS/MS已經成為首選的方法;該方法的特異性是依賴于采用色譜分離來分離分析物與內源性基質組分，以及在質譜儀中采用多反應監測技術(MRM)進行檢測。
為實現分析的耐受性，應使待檢測的分析物與內源性基質峰(例如磷脂)分離，否則可能會導致離子抑制并由此導致結果不可重現。
通常會權衡生物分析的分析速度與分離度,以達到最佳的色譜分析效果。較長的分離時間會使分離度更佳，但會使通量減少。
采用亞-2-ìm顆粒UPLC技術可改善生物分析的通量。
然而，隨著相關法規日漸嚴格，以及對分析靈敏度的要求逐漸提高，對色譜性能也提出了更高的要求。例如干血斑以及微量采樣這樣的采樣技術已經對當前方法的檢測極限提出了挑戰。
解決方案
ACQUITY UPLC I-Class系統專為進行超高效色譜分離而設計。它的先進技術可以使即使在較高系統背景壓力下工作時，也能很好的控制擴散以及譜帶擴展。這些因素使得在進行生物分析時能夠采用更長的分析色譜柱，同時也不會減少通量，還能夠產生非常尖銳的分析峰。
一超高效UPLC/MS/MS性能實例如圖1所示。中我們可以觀察到氟替卡松丙酸酯及昔美酸沙美特羅已從干血斑中分離出來。該次分析是在2.1 x 150 mm ACQUITY UPLC C 18 1.7-ìm色譜柱上進行，并用50:85甲醇/氫氧化銨水溶液梯度梯度洗脫10分鐘。橙色圖譜表示正離子全掃描MS數據;沙美特羅及氟替卡松丙酸酯的MRM譜圖已用藍色分別表示。
從中我們可以看出，干血斑中含有大量干擾物質，這些干擾物質是來自于添加至板上的化學藥品。超高效ACQUITY UPLC I-Class系統可產生非常尖銳的峰形，可在無基質干擾下定量兩種藥物分子。
為進一步說明該系統的超高效，將氟替卡松丙酸酯及昔美酸沙美特羅添加至大鼠血漿，并利用乙腈使其沉淀(比例2:1)。于該實例中，經時5分鐘，利用5:95甲醇/甲酸水溶液梯度來洗脫分析物，如圖2
上述數據說明，如藍色所示的背景全掃描MS色譜的復雜程度比干血斑更高。橙色線表示兩種藥物化合物的MRM信號，在2.58分鐘時洗脫出沙美特羅，且在2.65分鐘時洗脫出氟替卡松丙酸酯。自UPLC/MS/MS數據可以看出，ACQUITY UPLC I-Class系統可以超高效使已沉淀血漿樣品中的內源性物質與分析物分離，因此可準確且可靠地定量分析物。
小結
ACQUITY UPLC I-Class系統可提供最高水平的色譜性能，提供極佳的分布特性，以及由于增加的背壓能力因而可使用長度更長的色譜柱。使用超高效UPLC進行生物分析可產生尖銳的分析物峰，因而可產生最大的靈敏度以及最高的分離度，并使樣品中內源性物質的共溶出最少。該系統的高背壓有利于使用較長的超高效色譜柱，運行時間僅為5至及10分鐘。
