教育裝備采購網：藥用甘草為豆科植物烏拉爾甘草GlycyrrhizauralensisFisch.，脹果甘草GlycyrrhizainflataBat.或光果甘草GlycyrrhizaglabraL.的干燥根及根莖，是多年生藥用草本植物。植化研究表明甘草中存在大量的酚類成分，這些具有生物活性的成分有望成為開發新藥的來源[1]。甘草查爾酮A(licochalconeA)是存在于甘草中的一種酚類查爾酮化合物[2]，臨床及藥理研究表明，甘草查爾酮A具有抗氧化[3]、抗炎[4]、抗菌[5]、抗腫瘤[6]、抗利什曼原蟲病[7]、免疫促進和雌激素樣[8]等活性，在臨床上具有廣泛的應用前景，但有關其含量測定的方法還未見報道。本文建立了甘草查爾酮A的HPLC含量測定方法，為進一步開發甘草中這一重要活性成分提供簡便可行的檢測方法。
1儀器與試劑
美國Agilent1100液相色譜儀系統;KQ-100DB型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。
甘草由新疆昆侖神農有限公司贈送，經新疆甘草種植中心鑒定分別為烏拉爾甘草GlycyrrhizauralensisFisch.，脹果甘草GlycyrrhizainflataBat.和光果甘草GlycyrrhizaglabraL.。甘草查爾酮A對照品，本實驗室自制，經質譜、碳譜和氫譜鑒定為甘草查爾酮A(licochalconeA),歸一化測定含量為98.81%。乙腈、甲醇為色譜純;水為重蒸水;其他試劑均為分析純。
2方法與結果
2.1溶液制備
2.1.1對照品溶液的制備準確稱取在60℃干燥至恒重的甘草查爾酮A對照品適量，用流動相配成濃度為0.1mg·ml-1的對照品儲備液，待用。
2.1.2供試品溶液的制備準確稱取干燥恒重甘草粉末(過60目篩)0.5g，置100ml具篩錐形瓶中，加入甲醇25ml，超聲處理(功率200W，頻率40kHz)30min，過濾，再加入甲醇20ml，超聲處理30min，合并濾液，減壓濃縮至干，加流動相溶解并定容至50ml，微孔濾膜(0.45μm)過濾，即得供試品溶液。
2.2色譜條件
色譜柱為大連依利特HypersilODS2C18柱(4.6mm×250mm,5μm);柱溫25℃;流動相為甲醇-水-冰醋酸(60∶40∶1);檢測波長372nm;流速1.0ml·min-1。
2.3方法學考察
2.3.1線性關系考察
準確吸取甘草查爾酮A對照品儲備液2，4，6，8，10ml分別置于5個10ml容量瓶中，用流動相稀釋至刻度。分別吸取上述對照品溶液各10μl，依次注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以濃度C(μg/ml)為橫坐標，色譜峰面積A為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為：A=41308C-142057，r=0.9992，線性范圍為：0.2～1.0μg。
2.3.2精密度實驗
準確吸取濃度為100μg·ml-1的甘草查爾酮A標準品溶液10μl，重復進樣5次，測得峰面積值，計算相對標準偏差RSD為1.51%，說明儀器良好。
2.3.3重復性實驗
準確稱取同一批次的脹果甘草5份，按“2.1.2”項下制備樣品溶液，依次測定，根據標準曲線換算甘草查爾酮A的含量，計算甘草查爾酮A含量的RSD為2.54%，表明實驗方法重復性較好。
2.3.4穩定性實驗
取同一份待測供試品溶液，在0,2,4,8,12h進樣測定，測得甘草查爾酮A峰面積值并計算樣品峰面積的RSD為1.72%，表明供試品溶液于12h內穩定。
2.3.5加樣回收率實驗
準確稱取已知含量的樣品約0.1g(共5份)，精密加入0.10mg/ml的甘草查爾酮A標準品1ml，按“2.1.2”項下方法制備所需溶液，測定并計算含量。表1結果表明甘草查爾酮A平均回收率為98.76%，RSD為1.94%。表1樣品加樣回收率實驗結果(略)
2.4樣品測定
按照本方法的測定條件，分別測定《中國藥典》收錄的3種甘草樣品，計算甘草查爾酮A的含量，結果見表2。甘草查爾酮A標準品及樣品HPLC圖譜見圖1～2。表2甘草查爾酮A含量測定結果(略)
3討論
3.1色譜條件選擇
比較了乙腈-水(60∶40)、甲醇-水(70∶30)、甲醇-水-冰醋酸(60∶40∶1)、乙腈-甲醇-水(40∶30∶30)等流動相體系，結果第3種流動相分離效果最好，所以，本文選用甲醇-水-冰醋酸(60∶40∶1)為流動相。
3.2溶液制備方法
比較了不同提取溶劑(甲醇，乙醇，丙酮)和提取方法(回流提取，索氏提取，超聲提取)的提取效果，結果表明甲醇對甘草查爾酮A的提取效果優于其他兩種溶劑，索氏提取和超聲提取的效果相當，均優于回流提取，但索氏提取耗時較長，故本文以甲醇為提取劑采用超聲提取制備樣品供試溶液。
3.3檢測波長的選擇在200～700nm之間對甘草查爾酮A對照品溶液進行光譜掃描，結果表明在372nm處有極大吸收，故選擇372nm為檢測波長。
結果表明該方法簡單，快捷，專屬性強，準確度高，具有良好的重復性，可用于甘草中甘草查爾酮A的含量測定。
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