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儀器介紹：
智能全控高效液相色譜系統LC-100plus等度配置
目的采用高效液相色譜法對小薊中蘆丁成分進行定量。方法采用LichrospherC18色譜柱(4.6mm×200mm,5μm),柱溫30℃,甲醇-0.5%醋酸(體積比為35∶65)為流動相,流速1.0mL/min,檢測波長254nm。結果小薊中蘆丁的含量為0.5808mg/g。結論經過系統的方法學考察,該方法具有簡便、專屬、穩定、可重復的特點,可用于小薊中蘆丁的含量測定。
小薊為菊科植物小薊[Cirsiumsetosum(Willd.)MB.]的干燥地上部分或根,具有涼血止血、祛瘀消腫的功能,可用于治療衄血、吐血、尿血、便血、崩漏、外傷出血、癰腫瘡毒等。小薊中所含有機酸中有蘆丁、咖啡酸等,文獻記載蘆丁、咖啡酸為其止血活性成分。本實驗采用高效液相色譜法測定小薊中蘆丁的含量,方法穩定、快速、重現性好。
1實驗材料
1.1儀器
LC-10AT高效液相色譜儀,SPD-10A檢測器,CLASS-LC10色譜工作站;sartoriusBP211D電子天平;SHIMADZUAY220電子天平;KQ-500型超聲波清洗器。
1.2試劑與藥物
甲醇為色譜純,水為重蒸餾水,其它試劑均為分析純。蘆丁購自中國藥品生物制品檢定所(批號0080-9705)。小薊藥材分別購自江蘇(南京醫藥股份有限公司,批號020313)、安徽(安徽省亳州市永剛飲片有限公司,批號031205)、上海(上海華宇藥業有限公司,批號040802),經本院藥用鑒定教研室陳建偉教授鑒定為小薊正品[Cirsiumsetosum(Willd.)MB.]。
1.3色譜條件及系統適用性試驗
1.3.1色譜條件的選擇
色譜柱：LichrospherC18(4.6mm×200mm,5μm),柱溫30℃,流動相：甲醇-0.5%醋酸(體積比為35∶65),流速1.0mL/min;檢測波長：254nm。對照品、樣品的高效液相色譜圖見圖1。
1.3.2提取溶劑的考察
取本品2份,各1.0g,精密稱定,置2個50mL具塞錐形瓶中,分別加入50mL甲醇和50mL40%甲醇,稱重,浸置1h,超聲處理(功率500W,頻率50kHz)40min,補足稱重,濾過;微孔濾膜(0.45μm)濾過,即得。分別吸取上述2份溶液各10μL,注入高效液相色譜儀,按外標法以峰面積計算。結果表明,以體積分數為40%甲醇為提取溶劑效果較好。
2方法與結果
2.1溶液制備
2.1.1對照品溶液的制備
精密稱取蘆丁對照品0.98mg,置25mL容量瓶中,加40%甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得。
2.1.2供試品溶液的制備
各取3個產地藥材粉末(過2號篩)1.0g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,分別加入50mL40%甲醇,稱重,浸置1h,超聲處理(功率500w,頻率50kHz)40min,補足稱重,過濾,微孔濾膜(0.45μm)濾過,即得。
2.2線性關系考察
分別精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5mL稀釋10mL,依次精密吸取稀釋的對照品溶液10μL注入液相色譜儀,測定其峰面積值,以蘆丁的濃度(g/L)為橫坐標,峰面積積分值為縱坐標,進行線性回歸。得回歸方程為：Y=25845255X-28716,r=0.9996。結果表明,蘆丁在0.00392～0.0196g/L范圍內具有良好的線性關系。
2.3精密度試驗
吸取3號對照品溶液10μL,重復進樣5次,測定其峰面積積分值,RSD=1.503%。表明本法精密度較好。
2.4穩定性試驗
分別于0、1、2、4、6、12、24h精密吸取同一份供試品溶液20μL進樣,測定其峰面積積分值,計算6h內RSD=1.972%。結果表明,供試品溶液在6h內常溫保存基本穩定。
2.5重復性試驗
取同一批號小薊樣品共5份,每份1.0g,精密稱定,按供試品溶液的制備方法平行制備5份,分別進樣10μL,每份測定2次,平均含量為0.7035mg/g,RSD=1.129%。
2.6回收率試驗
精密稱取小薊樣品6份,各1.0g,分別精密加入蘆丁對照品適量,按供試品溶液的制備方法制備,每次進樣10μL,每份測定2次,取平均值,計算加樣回收率,平均加樣回收率為98.70%,RSD=2.88%。見表1。表1蘆丁加樣回收率測定結果(略)
2.7樣品測定
取3個產地的小薊樣品,按供試品溶液的制備方法制備,分別精密吸取對照品溶液和樣品溶液,注入液相色譜儀,測量峰面積,按外標法計算,結果總平均值為0.5808mg/g。見表2。表2小薊中蘆丁含量測定結果(略)
3小結
對于小薊中蘆丁的含量測定,有人曾采用聚酰胺薄層掃描法[1],此法受薄膜表面光潔度、均勻度、厚薄等因素影響而不太穩定,張氏等[2]采用HPLC法測定苦蕎麥中蘆丁含量。查閱文獻,還未曾有人用過HPLC法測定小薊中蘆丁含量。本實驗采用HPLC法測定蘆丁含量,具有簡便快速、結果準確可靠的特點,可以作為小薊藥材及飲片質量控制方法。
