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          高效液相色譜法測定鷹不撲中齊墩果酸的含量

          教育裝備采購網 2011-08-11 16:32 圍觀407次

            教育裝備采購網訊:鷹不撲又名鳥不企、老鴉怕等,為五加科植物黃毛楤木的干燥根,主產于廣西、廣東和湖南等地,具有清熱解毒、祛風除濕、散瘀消腫之功效,用于治療跌打損傷、風濕性腰腿痛、急慢性肝炎、腎炎水腫、淋巴結腫大、咽喉炎、蛇咬傷及糖尿病等癥[1]。鷹不撲主要含以齊墩果酸為主的三萜皂苷[2]。齊墩果酸是主要有效成分,原標準(收載于《廣西中藥材標準》1990年版)未有含量測定項,文獻報道僅為薄層掃描法[3]對齊墩果酸進行定量分析。本試驗首次采用HPLC法對鷹不撲中齊墩果酸進行含量測定,為藥材使用和質量控制提供科學依據。

            1儀器與試藥

            LC-10AT日本島津高效液相色譜儀(帶紫外可見檢測器),日本島津UV-2001紫外分光光度計,威瑪龍化學工作站。

            齊墩果酸對照品(批號110709-200304,含量測定用)由中國藥品生物制品檢定所提供;鷹不撲由廣西玉林制藥有限責任公司提供,經廣西玉林制藥有限責任公司中藥鑒定室鑒定為五加科植物黃毛楤木AraliadecaisneanaHance的干燥根。水為重蒸餾水,甲醇為色譜純,其余試劑均為分析純。

            2方法與結果

            2.1色譜條件

            Lichrospher-C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm),流動相為甲醇-0.2%磷酸溶液(85∶15)[4];流速:1.0mL/min;檢測波長:210nm;柱溫:30℃;進樣量:10μL。理論板數按齊墩果酸計算應不低于3000(色譜圖見圖1)。

            2.2對照品溶液的制備

            精密稱取齊墩果酸對照品適量,加甲醇制成每1mL含齊墩果酸59μg的溶液,作為對照品溶液。

            2.3供試品溶液的制備

            取鷹不撲粉末約0.5g,精密稱定,置平底燒瓶中,精密加入甲醇-15%鹽酸(4∶1)50mL,稱定重量,水浴加熱回流5h,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,濾液用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取續濾液,作為供試品溶液。

            2.4線性關系的考察

            分別精密吸取齊墩果酸對照品溶液(59.0μg/mL)1、2、4、6、8、10mL,置于10mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,各進樣10μL,連續進樣2次,測定峰面積。以對照品進樣量(C)為橫坐標,峰面積(A)為縱坐標,繪制標準曲線,得回歸方程:A=2.6186×105C-473.5,r=0.9998(n=6),結果表明,齊墩果酸在0.059~0.59μg范圍內呈良好的線性關系。

            2.5精密度試驗

            取齊墩果酸對照品溶液,各重復進樣6次,測定峰面積,結果齊墩果酸峰面積平均值為157847,RSD=0.58%(n=6)。

            2.6重現性試驗

            取同一批號樣品6份,按“2.3”項下方法制備供試品溶液,測定,結果齊墩果酸峰面積平均值為120822,RSD=1.09%(n=6)。表明該法重現性良好。

            2.7穩定性試驗

            取同一供試品溶液,分別于配制后0、4、8、12、24h依法測定峰面積,結果齊墩果酸RSD=1.25%,表明樣品溶液在24h內基本穩定。

            2.8加樣回收率試驗

            取已知齊墩果酸含量的鷹不撲粉末約0.2g,精密稱定,平行稱取6份,各加入一定量的齊墩果酸對照品,按“2.3”項下方法制備供試液,按上述色譜條件測定。結果齊墩果酸平均加樣回收率為95.4%,RSD=0.67%,說明該方法準確可靠。見表1。表1齊墩果酸加樣回收率試驗結果(略)

            2.9樣品測定

            取鷹不撲樣品,按“2.3”項下方法操作,在上述色譜條件下進行測定,結果見表2。表2樣品含量測定結果(略)

            3討論

            齊墩果酸標準品在紫外分光光度計190~500nm波長范圍進行光譜掃描,其最大吸收波長為203nm,但由于流動相在短波長處有末端吸收,為了減少干擾,提高信噪比,采取不同波長的色譜圖進行比較。選擇210nm為檢測波長,檢測器響應值大,基線平穩,峰形好。

            本試驗考察不同的酸(硫酸、鹽酸、醋酸)及酸度(5%、15%、30%)回流提取,其中15%鹽酸甲醇液直接回流提取的水解效果最好,比一般水解過程(先甲醇提取再水解)簡單,重現性好。首次采用HPLC法對鷹不撲中齊墩果酸進行含量測定,精密度優于薄層掃描法,無需顯色,結果穩定,方法簡便。為用HPLC法測定鷹不撲中齊墩果酸含量,提供了一種可借鑒的方法。

            鷹不撲的傳統藥用部位為根,本試驗考察廣西不同地區的鷹不撲,齊墩果酸的含量相差不大,根與莖的含量也相差不大,可以用其莖作為藥用部位,擴大藥用范圍。(謝沂楠/編輯)

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          高效液相色譜儀EX1600

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