一、實驗器材及試劑
1、實驗器材
名稱廠家型號
臨界點干燥儀QuorumK850
離子濺射儀IXRFMSP-2S
掃描電子顯微鏡hitachiSU8010
2、主要實驗試劑
試劑廠家貨號
電鏡固定液ServicebioG1102
無水乙醇國藥集團化學試劑有限公司
PBSServicebioG0002
鋨酸Ted Pella Inc
二、掃描電鏡制樣步驟
1、取材固定：新鮮組織確定取材部位，盡量減小牽拉、挫傷與擠壓等機械損傷，1-3min內取樣，組織塊不超過3mm2，用PBS輕輕漂洗將樣本表面的血污，毛發等去掉，保護好需要掃描的面并做好標記（如在對面進行剪角處理）。迅速投入電鏡固定液室溫固定2h，再轉移至4°保存。
貼壁細胞：貼壁于蓋玻片的細胞培養處理完成后棄培養基，用PBS輕輕漂洗后，棄PBS加電鏡固定液室溫固定2h，再轉移至4°保存。注意保護好掃描面避免劇烈震蕩細胞脫落。
2、后固定：固定好的樣品經0.1M磷酸緩沖液PB（（PH7.4）漂洗3次，每次15min。1%的鋨酸·0.1M磷酸緩沖液PB（PH7.4）室溫（20℃）固定1-2h。0.1M磷酸緩沖液PB（PH7.4）漂洗3次，每次15min。
3、脫水：組織依次入30%-50%-70%-80%-90%-95%--酒精每次15min。
4、干燥：將樣本放入臨界點干燥儀內進行干燥。
?。o機材料不需要以上步驟）
5、樣本導電處理：將樣本緊貼于導電碳膜雙面膠上放入離子濺射儀樣品臺上進行噴金30s左右。
6、掃描電子顯微鏡下觀察采圖。
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