DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法?;瘜W方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法。生物方式:酶法。根據核酸分離純化方式的不同有;硅質材料、陰離子交換樹脂等。
方法(一)
試劑:
1. 抽提緩沖液、2% CTAB (W/V)、2% PVP K25 (w/v) (去色素)、100mM Tris-HCl (pH8.0)、25mM EDTA、(pH8.0)、2.0M NaCl。上海創賽提供乙二胺四乙酸(EDTA)標液,60-00-4,商品編號:D16-1014183-濃度:0.1N/L,價格288元。
2.10M LiCl
3. 2M LiCl
4.DEPC-water(抑制RNA酶活性)
5. 3M NaAc (pH5.2)
6. 96% 乙醇
7. 70% 乙醇
步驟:
1.抽提緩沖液65℃預熱;
2. 加菌體到已經預熱的緩沖液(700ul)中混勻,65℃,10min;
3. 加酚/氯仿/異戊醇(25:24:1),振蕩,離心12,000rpm,10min;
4.取上清,加氯仿/異戊醇(24:1)振蕩,離心12,000rpm,10min;
5. 取上清,重復4步驟;
6. 加入1/10體積的3M醋酸鈉和1.5倍體積的乙醇(或加入等體積的異丙醇),-20C沉淀;
11. 離心12,000rpm,10min;
12. 棄上清,70%乙醇洗,也可以再用100%乙醇洗,然后溶解于100ml 水中。
方法(二)
1. 將菌株接種于液體LB培養基,37℃震蕩培養過夜。
2. 取1.5ml培養物12000rpm離心2min。
3. 沉淀物加入567 ul的TE緩沖液,反復吹打使之重新懸浮,加入30ul 10%SDS和15ul的蛋白酶K,混勻,于37℃溫育1h。上海創賽提供十二烷基硫酸鈉(SDS),AR,92.5-100.5%,151-21-3,商品編號:C16-S10436-500g,價格50元。
4. 加入100ul 5mol/L NaCl, 充分混勻,再加入80ul CTAB/NaCl溶液,混勻后再65℃溫育10min。
5. 加入等體積的酚/氯仿/異戊醇混勻,離心4-5min, 將上清轉入一只新管中,加入0.6-0.8倍體積的異丙醇,輕輕混合直到DNA沉淀下來,沉淀可稍加離心。上海創賽提供異丙醇,99.5%,超干,含分子篩,水≤50ppm,67-63-0,商品編號:C52-H11026-100ml,價格150元。
6. 沉淀用1ml的70%乙醇洗滌后,離心棄乙醇。
CANSPEC品質提供的性能卓越,其優秀的品質滿足您不同實驗的多種需求,現貨,生化試劑,原料藥,醫藥中間體,科學儀器,實驗室耗材,上海創賽,海量產品特價促銷中,歡迎來電咨詢!