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Lambda25/35/45紫外可見分光光度計
主要特點
1、儀器原理：雙光束、雙單色器、比例記錄并由計算機控制的紫外/可見分光光度計。
2、波長范圍寬：190～1100nm
3、Lambda25為1nm固定狹縫， Lambda35和45的狹縫為可調型，用戶可在0.5,1,2,4nm的四種狹縫中任選; Lambda45中包括一個前置單色器，從而使儀器的雜散光指標更低，全波長范圍內吸光度的線性范圍大大提高。
4、最穩定、長壽命、寬范圍的固體檢測器(SCD，PMT只能到900nm)
5、Lambda25、35、45系列紫外/可見分光光度計為基于結果的高質量的光學系統，儀器信號的穩定性極高：對于時間驅動的試驗或大量樣品的連續測定非常重要;
6、全息光柵的雜散光極低，確保了真實的吸光度有寬的線性范圍。
7、儀器的噪音極低，可準確地測出極低的吸光度;
8、多種附件的擴充功能：
溫度控制(單池或多池的水浴或半導體控溫的池架)
不同長短光程比色杯及架
固體的透射分析
相對鏡反射附件：6度固定角(用于反射和厚度測量)，15～70度變角;
漫反射附件：50mm積分球(Lambda 35專用)
AS93 plus自動進樣器
流動注射分析系統
溶出度系統
光纖附件(目前世界上測試范圍最寬——可測到紫外區、反射效率最高的光纖!)
液體采樣附件
固體采樣附件
9、基本軟件功能強大、另有多種軟件可選：
UV WinLab 軟件：基于操作控制基礎上的軟件，主要可提供記錄、處理及儲存光譜數據，定量分析, 并進行儀器校驗，儀器的控制及附件的控制等。還包括KinLab(酶動力學)軟件及多達50種的生化(Bio)分析方法。
技術參數
1實驗材料
儀器：Lambda25型紫外/可見分光光度計[珀金埃爾默儀器(上海)有限公司];KS-600D超聲清洗器(寧波科生儀器廠);AG285電子分析天平(德國梅特勒公司)。
試劑：XDA-5大孔吸附樹脂(西安藍曉科技有限公司);氯化兩面針堿(中國藥品生物制品檢定所,供含量測定用,批號848-9901)。所用試劑均為分析純。
藥物：兩面針藥材飲片分別購自桂林、南寧、玉林各產地。
2方法與結果
2.1測定波長的選擇
取氯化兩面針堿對照品,加95%乙醇溶解制成7μg/mL的
溶液,置1cm吸收池中,以95%乙醇液為空白,在250～500nm波長范圍內掃描。另取兩面針藥材提取液,照“2.3”項方法處理,稀釋至一定濃度,置1cm吸收池中,在250～500nm波長范圍內掃描,對照品及兩面針提取液在329nm處均有最大吸收,并且在328～331nm處峰型較平坦,有利于測定,故選擇329nm作為測定波長。見圖1。
2.2線形關系考察
分別精密移取氯化兩面針堿標準溶液(0.1mg/mL)0.75、1.0、1.25、1.5、1.75、2.0mL,用乙醇定容至25mL容量瓶中。按“2.1”項方法操作,于329nm波長處測定吸收度,以濃度為橫坐標,吸光度為縱坐標,繪制標準曲線,得回歸方程：Y=97.75X-0.0255,r=0.9991(n=6)。結果表明,樣品液在3～8μg/mL之間呈線性關系。
2.3供試品的制備
2.3.1提取方法
精密稱取兩面針藥材粉末0.1g(過100目篩),置錐形瓶中,加25mL60%乙醇,超聲30min(工作頻率25～40MHz),抽濾,重復1次,合并濾液,減壓回收乙醇,加pH為3的酸水溶解,過濾,酸濾液再用等體積乙酸乙脂萃取2次,除去香豆素、木脂素等脂溶性雜質。
2.3.2大孔吸附樹脂純化工藝
2.3.2.1大孔樹脂預處理
精密稱取XDA-5型大孔樹脂2g,95%乙醇濕法裝玻璃層析柱(1cm×50cm),繼續用95%乙醇在柱上淋洗,不時檢查流出的乙醇,至與水混合(1∶5)不呈白色渾濁為止。最后用蒸餾水洗去層析柱中的乙醇,備用。
2.3.2.2吸附洗脫分離工藝
將提取液上柱,流速控制20mL/h。泄漏液無生物堿陽性反應,說明總生物堿已全部吸附。將已吸附好樣品的XDA-5樹脂先用50mL水洗脫除去無機鹽、蛋白質、多糖等雜質,再用50mL95%乙醇洗脫,流速控制20mL/h,接取95%乙醇的洗脫液,最終定容至50mL,即得供試品溶液。
2.4精密度考察
在同一樣品液中分別精密移取5份,于329nm波長處測定吸收度,計算含量。分別為6.24%、6.12%、6.23%、5.98%、6.00%,RSD=2.01%(n=5)。
2.5重復性考察
精密稱取兩面針藥材細粉,按“2.3”項方法提取,于329nm處測定吸收度,計算含量。結果分別為6.25%、6.22%、6.23%、6.24%、6.26%,RSD=2.20%(n=5)。結果表明重復性較好。
2.6穩定性試驗
取供試品溶液,在0、1、2、4、8、12、18、24h分別測定吸收度,結果顯示在24h內基本穩定,RSD=2.14%(n=8)。
2.7加樣回收率試驗
分別精密稱取5份已知含量的兩面針藥材細粉0.05g,每份精密加入相當于氯化兩面針堿3.0mg的對照品溶液,按“2.3”項方法提取,于329nm處測定吸收度,計算?；厥章史謩e為101%、99.5%、102%、96%、98.8%,平均為99.5%,RSD=2.32%(n=5)。
2.8樣品測定
按照以上方法測定3種不同產地兩面針藥材中總生物堿的含量,每種產地的藥材分別平行測定5批。結果見表1。表1不同產地兩面針藥材細粉中總生物堿的含量測定結果(略)
3討論
總生物堿的含量測定一般都采用酸性染料比色法[2-4]或根據單體堿的母核相同直接測定[5],本試驗曾試過用溴甲酚綠和溴麝香草酚藍顯色,用比色法在422nm處測定吸收度,但結果極其不穩定,因此,酸性染料比色法不適用于測定兩面針中總生物堿的含量。
兩面針中主要含生物堿,且主要為苯并菲啶類生物堿[1]。已報道的7個單體堿在(329±2)nm波長處均有共同吸收[1]。并且樣品液用“2.3”項的方法處理后,可有效的排除其它成分的干擾,與測定結果一致。
在大孔樹脂純化總生物堿的工藝中,曾采用XDA-5、HPD-100和LSD-5B等8種大孔樹脂對兩面針中總生物堿進行吸附和解吸附考察,其中XDA-5的動態吸附分離效果最好,適合于兩面針中總生物堿的提純。
由于3種不同產地兩面針藥材中總生物堿的含量相差較大,經仔細觀察,從桂林購買的取藥部位是根,而購于南寧、玉林兩地的取藥部位是莖。因此,藥材部位不同總生物堿的含量相差較大,根部比莖部的總生物堿含量明顯偏高。故《中華人民共和國藥典》中測兩面針中生物堿含量取藥部位是根是有道理的[6]。
采用酸水冷浸、60%乙醇回流提取、60%乙醇超聲提取3種方法測得的同一批次的兩面針藥材粉末的含量平均值分別是2.65%、1.65%、6.01%;因此,超聲提取方法優于其它兩種,并且延長超聲時間含量不再增加,表明提取完全。
兩面針[Zanthoxylumnitidum(Roxb.)DC.]為蕓香科花椒屬植物,在我國主要分布于福建、廣東、廣西、云南等地,是民間常用的一種植物藥。其根、根皮及莖皮入藥,具有抗腫瘤、鎮痛等作用。主治風濕性關節痛、牙病、胃痛、咽喉腫痛、毒蛇咬傷等癥。兩面針中主要含生物堿,且主要為苯并菲啶類生物堿[1]。目前文獻尚未有對其總生物堿進行含量測定的報道。本試驗建立了以紫外分光光度法測定兩面針中生物堿類化合物含量的方法。
