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        1. 教育裝備采購網
          第八屆圖書館論壇 校體購2

          瘦肉精及其測試方法、檢測儀器總結簡介

          教育裝備采購網 2011-03-28 19:38 圍觀635次

            教育裝備采購網訊:自央視3·15曝光雙匯瘦肉精豬肉以來,引起廣泛關注,“瘦肉精”成為網絡搜索的熱門詞匯,也一直是大家關注的民生問題。

            瘦肉精是一類動物用藥,將瘦肉精添加于飼料中,可以增加動物的瘦肉量、減少飼料使用、使肉品提早上市、降低成本。在中國,通常所說的“瘦肉精”則是指克倫特羅,它曾經作為藥物用于治療支氣管哮喘,后由于其副作用太大而遭禁用。目前,能夠實現這種功能的物質是一類叫做β-受體激動劑的藥物,例如萊克多巴胺和沙丁胺醇等,同樣能起到“瘦肉”作用、卻對人體健康危害過大,因而造成安全隱患。它們也因而在全球遭到禁用。分子式:C12-H18-Cl2-N2-O。白色或類白色的結晶粉末,無臭、味苦,熔點161℃,溶于水、乙醇,微溶于丙酮,不溶于乙醚。

            瘦肉精按照GB/T 5009.192-2003 動物性食品中克倫特羅殘留量的測定方法進行檢測。常見的檢測方法有以下幾種:

            氣相色譜-質譜法(GC-MS)

            GC-MS法優點是把色譜高效快速的分離效果和質譜高靈敏度的定性分析有機合起來,能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進行定性、定量分析,而且具更高的檢測極限。另外,GC-MS法與HPLC法相比,檢測靈敏度更高,假陽性率更低。因此,我國將GC-MS法定為檢測CLB的確證性方法(NY/T468~2001)。

            島津上海分析中心推出了基于GC -MS法的克倫特羅檢測方案。GC-MS法具有靈敏度高、假陽性率低的特點,常用作篩選后陽性樣品的確證。本方案針對鹽酸克倫特羅的化學性質,建立了C18小柱和聚(甲基丙烯酸-乙二醇二甲基丙烯酸酯)整體柱二維萃取的方法。樣品提取后,用C18小柱和聚(甲基丙烯酸-乙二醇二甲基丙烯酸酯)整體柱進一步富集凈化,經N ,O-雙三甲基硅烷三氟乙酰胺 (BSTFA) 衍生,選擇離子監測方式進行氣相色譜質譜測定。該方法以克倫特羅同位素(Clenbuterol-D9) 為內標,內標法定量。豬肉中克倫特羅的檢出限為0.13 μg/kg,在0.5~50 μg/kg的濃度范圍內具有良好的線性關系,r大于0.999。日內、日間相對標準偏差不高于20%,加標回收率大于75%。結果表明,該方法簡單、快速、靈敏度高、重現性好,適用于豬肉中克倫特羅的測定。

            高效液相色譜法(HPLC)

            HPLC適合測定熱不穩定和強極性的β-激動劑及其代謝產物,而且,HPLC可以與柱前提取、純化及柱后熒光衍生化反應和質譜(MS)等系統聯用,容易實現分析過程的自動化。目前,我國已將HPLC法作為檢測CLB殘留的半確證性方法,最低檢測限范圍為1~15ng/g,其優點是專屬性好、選擇性強、檢測精確度較高,而且假陽性率低;缺點是樣品處理時間長,檢測。

            禾工科學儀器推出STI5000系列液相色譜儀(HPLC)檢測肉制品中瘦肉精。本方法在豬的肌肉和肝臟組織中的檢測限為0.001ug/g’回收率范圍為80%±20%。

            酶聯免疫吸附法(ELISA )

            利用免疫學抗原抗體特異性結合和酶的高效催化作用,通過化學方法將植物辣根過氧化物酶(HRP)與克倫特羅(CL)結合,形成酶偶聯克倫特羅。將固相載體上已包被的抗體(羊抗兔IgG抗體)與特異性的抗克倫特羅抗體結合,然后加入待測克倫特羅和酶偶聯克倫特羅,它們競爭性與克倫特羅抗體結合,洗滌后加底物,根據有色物的變化計量待測克倫特羅量。若待測克倫特羅多,則被結合的酶偶聯克倫特羅少,有色物量就少。用目測法或比色法測定樣品中的克倫特羅含量,比色的最佳波長為450 nm,參比波長應大于600 nm。酶聯免疫吸附法(ELISA)具有檢測速度快、靈敏度高的特點,適用于現場定性快速檢測。

            適合進行瘦肉精檢測的酶標儀型號—Biochrom Anthos zenyth 340rt 酶標儀

            推薦理由:

            波長范圍:340-750nm---滿足測定需要的波長范圍

            讀數范圍:0.000-4.000 OD—滿足讀數結果范圍

            讀板速度:18秒/96孔—檢測速度快

            控溫范圍:室溫+4-45℃--試劑盒最佳反應溫度為25℃,帶有控溫功能的酶標儀可以使讀數結果更加準確

            震蕩模式:3種速度—滿足需要震蕩使反應進行的更加充分,結果更加準確

            標配濾光片:340、405、450、492、620nm—滿足測量波長450nm和參比波長620nm,還可以進行紫外檢測

            內置軟件:ADAP Basic軟件—可儲存和輸出結果,滿足數據處理

            膠體金免疫層析法(Colloidal gold immunochromatography)

            利用競爭法膠體金免疫層析技術,檢測液中的Clen與金標墊上的金標抗體結合形成復合物,若Clen在檢測液中濃度低于靈敏度值,未結合的金標抗體流到T區時,被固定在膜上的Clen-BSA偶聯物結合,逐漸凝集成一條可見的T線;若Clen濃度高于靈敏度值,金標抗體全部形成復合物,不會再與T線處Clen-BSA偶聯物結合形成可見T線。未固定的復合物流過T區被C區的二抗捕獲并形成可見的C線。C線出現則表明免疫層析發生,即試紙有效.

            鹽酸克侖特羅(瘦肉精)快速檢測卡(操作方便快捷,市民自己就可以操作)采用競爭抑制免疫層析技術的原理來測定動物尿液、組織和飼料中的鹽酸克侖特羅。試劑含有被預先固定于膜上檢測帶(T)的鹽酸克侖特羅偶聯物和被膠體金標記的抗鹽酸克侖特羅單克隆抗體。檢測時樣品和標記抗體競爭結合偶聯物。檢測限為3ng/ml(3ppb)。

            液相色譜—質譜/質譜法(HPLC-MS/MS)

            參見SN/T 1924—2007 進出口動物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測方法。

            本標準適用于動物源性食品肌肉和內臟中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測。

            試樣中的藥物殘留采用pH5.2的乙酸銨緩沖液提取,同時加入β-鹽酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶進行酶解后,提取液經C18和SCX雙SPE柱凈化,液相色譜—質譜進行測定,內標法定量。

            過程煩瑣、難于操作,需貴重儀器,在實際應用中受到一定的限制。

            近期,島津推出聯用超高效液相色譜儀LC-30A和三重四極桿質譜儀LCMS-8030測定豬肉中克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇的方法。

            使用島津超高效液相色譜串聯質譜聯用法檢測豬肉中克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇的方法,首先,在樣品經提取后,用超高效液相色譜LC-30A快速分離,三重四極桿質譜儀LCMS-8030進行定量分析。本方法分析速度快,精密度良好,線性范圍寬(0.05~100 ng/mL),校準曲線的相關系數在0.999以上。方法定量限滿足國標0.5 μg/kg的要求,并且對于豬肉中克倫特羅的檢測方法定量限可以達到0.05 μg/kg,檢測靈敏度完全符合日本肯定列表的要求。

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